逐痰通絡(luò)湯對(duì)大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討逐痰通絡(luò)湯對(duì)大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用及其機(jī)制. 方法：實(shí)驗(yàn)選用清潔級(jí)雄性12周齡SD大鼠108只,隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(K組)、模型組(C組)、逐痰通絡(luò)湯組(Z組).K組、C組、Z組各36只.K組只分離頸動(dòng)脈,不插線栓.C組、Z組復(fù)制永久性大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型.模型制作前,K組自由飲食飲水不作特殊處理,C組每只大鼠先用生理鹽水(10ml/Kg/d)灌胃7天,Z組每只大鼠先用逐痰通絡(luò)湯(10ml/Kg/d)

2、灌胃7天.定模型復(fù)制同為第0天,C組于第0天起每只大鼠灌胃給生理鹽水(10ml/Kg/d);Z組于第0天起每只大鼠灌胃給逐痰通絡(luò)湯(10ml/Kg/d).分別于模型復(fù)制后第1天、第3天、第7天,K組、C組、Z組各隨機(jī)抽取6只大鼠,4﹪多聚甲醛灌注固定后留取大腦標(biāo)本;K組、C組、Z組各隨機(jī)抽取6只大鼠,用斷頭法處死后留取大腦標(biāo)本和第7天血液標(biāo)本.觀察各組動(dòng)物神經(jīng)功能缺損并評(píng)分;腦組織TTC染色并測(cè)定梗死體積;光鏡觀察腦組織病理學(xué)改變;發(fā)色

3、底物法測(cè)定血漿組織型纖溶酶原激活物、組織型纖溶酶原激活抑制物、纖溶酶原活性,ELISA法測(cè)定血漿D-二聚體含量;應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)MMP-9蛋白表達(dá),原位雜交法觀察MMP-9 mRNA表達(dá). 結(jié)果：1.神經(jīng)功能缺損評(píng)分:K組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)評(píng)分均為0分,即無(wú)神經(jīng)功能缺損.C組、Z組各時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)不同程度神經(jīng)功能缺損,術(shù)后第1天出現(xiàn)高峰,分值隨著時(shí)間增長(zhǎng)而呈現(xiàn)減少趨勢(shì).C組在第7天分值高于Z組(P<0.05).C組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較,

4、第3天分值與第1天無(wú)明顯差異(P>0.05),第7天分值低于第1天(P<0.05).Z組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較,第3天分值低于第1天(P<0.05):第7天分值明顯低于第1天(P<0.01). 2.腦組織TTC染色及梗死體積測(cè)定:各缺血模型腦組織TTC染色,表現(xiàn)為正常腦組織呈紅色,缺血壞死組織呈白色.K組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)梗死體積測(cè)定均為0,即無(wú)梗死灶.C組、Z組各時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)不同程度梗死,術(shù)后第1、3天出現(xiàn)高峰,梗死體積隨著時(shí)間增長(zhǎng)而呈

5、現(xiàn)減少趨勢(shì).C組在第7天梗死體積大于Z組(P<0.05).C組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較,第7天梗死體積小于第1天(P<0.05).Z組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較,第7天梗死體積明顯小于第1天和第3天(P<0.01). 3.腦組織病理光鏡觀察:K組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量多,細(xì)胞分布層次清楚,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰.C組、Z組左側(cè)大腦皮質(zhì)及皮質(zhì)下區(qū)出現(xiàn)固定梗死灶,缺血區(qū)及周邊存在大量萎縮變性的神經(jīng)元且淡染,胞漿及血管周?chē)栈?梗死灶周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn),以第3天表現(xiàn)最明顯.

6、隨著缺血時(shí)間增加,梗死灶縮小,神經(jīng)細(xì)胞萎縮變性減輕,細(xì)胞數(shù)量增加,炎癥反應(yīng)減輕,z組與C組相比,第7天上述表現(xiàn)更明顯. 4.血漿纖溶活性測(cè)定結(jié)果:C組、Z組造模后大鼠血漿PLG、PAI、DD活性顯著升高,與K組相比差異具有非常顯著性(P<0.01),而血漿t-PA活性顯著降低,與K組相比差異具有非常顯著性(P<0.01).Z組與C組相比,血漿PLG、PAI、DD活性較低(P<0.05,P<0.01);血漿t-PA活性較高(P<0

7、.05). 5.腦組織MMP-9免疫組化結(jié)果:MMP-9免疫組化染色以細(xì)胞漿呈棕黃色著色為陽(yáng)性細(xì)胞.梗死灶及周?chē)X組織發(fā)生MMP-9蛋白表達(dá),以神經(jīng)元表達(dá)為主.K組各時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞極少數(shù)表達(dá),C組、Z組各時(shí)間點(diǎn)均有不同程度表達(dá)(P<0.01),模型復(fù)制后第1天即有陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),第3天表達(dá)最多(P<0.01),第7天表達(dá)最少(P<0.01).而與C組相比,Z組第3、7天陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較少(P<0.05,P<0.01). 6.

8、腦組織MMP-9原位雜交結(jié)果:腦組織MMP-9原位雜交陽(yáng)性結(jié)果及定位分布基本與免疫組化相似.K組各時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞極少數(shù)表達(dá),C組、Z組各時(shí)間點(diǎn)均有不同程度表達(dá)(P<0.01),模型復(fù)制后第1天即有陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),第3天表達(dá)最多(P<0.01),第7天表達(dá)最少(P<0.01).而與C組相比,Z組第3、7天陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較少(P<0.05,P<0.01). 結(jié)論：1.逐痰通絡(luò)湯能夠促進(jìn)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損的恢復(fù)、減小梗死體積,減