低氧對(duì)胃癌細(xì)胞增殖及LINE-1核酸內(nèi)切酶變異體GCRG213表達(dá)影響的初步研究.pdf

1、研究背景:
　　低氧是實(shí)體腫瘤發(fā)展過程中的普遍特征。胃癌是胃黏膜上皮細(xì)胞變異產(chǎn)生的一種發(fā)病率及死亡率均較高的惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展涉及多基因的改變,低氧環(huán)境顯著影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。胃癌相關(guān)基因213(gastric cancer related gene 213,GCRG213)是本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的在胃癌組織中高表達(dá)的基因序列,屬于人長(zhǎng)散在核元件(long interspersed nuclear element-1,LINE-1

2、)家族成員,是LINE-1核酸內(nèi)切酶(LINE-1 endonuclesse,L1-EN)的變異體。前期研究提示GCRG213表達(dá)可能與胃癌細(xì)胞增殖相關(guān)。
　　目的:
　　研究不同低氧條件下胃癌細(xì)胞增殖改變以及對(duì)GCRG213和L1-EN表達(dá)的影響。
　　方法:
　　將人正常胃粘膜細(xì)胞GES-1與胃癌細(xì)胞BGC-823分別在20％O2、3%O2及0.3%O2濃度下進(jìn)行培養(yǎng),MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率的變化,RT-

3、PCR及Western blotting檢測(cè)細(xì)胞的GCRG213 mRNA和蛋白表達(dá)變化;RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中L1-EN mRNA表達(dá)變化;應(yīng)用衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(Senescence-associated β-Galactosidase,SA-β-gal)染色檢測(cè)細(xì)胞衰老情況。
　　結(jié)果:
　　(1)與20%O2濃度相比,GES-1細(xì)胞與BGC-823細(xì)胞在3%O2濃度條件下培養(yǎng)24h及48h后增殖升高(P<0.01

4、),細(xì)胞增殖升高幅度GES-1細(xì)胞大于BGC-823細(xì)胞增殖(P<0.05);在0.3%O2濃度條件下培養(yǎng)24h及48h后,GES-1細(xì)胞與BGC-823細(xì)胞增殖降低(P<0.05),細(xì)胞增殖降低幅度BGC-823細(xì)胞大于GES-1細(xì)胞(P<0.05);
　　(2)在20%O2濃度條件下,BGC-823細(xì)胞的GCRG213 mRNA及蛋白表達(dá)水平均高于GES-1細(xì)胞(P<0.05);
　　(3)與20%O2濃度相比,在3%O

5、2條件下培養(yǎng)48h后,GES-1細(xì)胞與BGC-823細(xì)胞中的GCRG213 mRNA及其蛋白表達(dá)均增高(P<0.05),且BGC-823細(xì)胞中GCRG213表達(dá)的增高幅度大于GES-1細(xì)胞(P<0.05);
　　(4)在0.3%O2條件下培養(yǎng)48h后,與20%O2培養(yǎng)條件相比,不論GES-1細(xì)胞還是BGC-823細(xì)胞中的GCRG213 mRNA及其蛋白表達(dá)均無顯著性差異,但兩種細(xì)胞中L1-EN mRNA的表達(dá)則顯著增高(P<0.0

6、5),且BGC-823細(xì)胞中L1-EN mRNA表達(dá)的增高幅度大于GES-1細(xì)胞(P<0.05);
　　(5)GES-1細(xì)胞與BGC-823細(xì)胞在3%O2條件下培養(yǎng)48h后,其GCRG213 mRNA及蛋白表達(dá)高于在0.3%O2條件下培養(yǎng)的細(xì)胞(P<0.05);
　　(6)在0.3%O2條件下培養(yǎng)48h后,BGC-823細(xì)胞SA-β-Gal染色的陽性細(xì)胞數(shù)顯著高于常氧對(duì)照組。
　　結(jié)論:
　　低氧環(huán)境可以影響胃癌