軟脂酸對腸道GLP-1分泌細胞活性及脂質(zhì)代謝酶的影響.pdf

1、目的:
　　2型糖尿病發(fā)病率在我國有明顯升高的趨勢,有學(xué)者提出可能與追趕生長方式密切相關(guān)。肥胖及T2DM患者可出現(xiàn)血游離脂肪酸的升高并伴有營養(yǎng)物質(zhì)刺激下的GLP-1的分泌受損。追趕生長人群及動物表現(xiàn)出明顯的脂質(zhì)不成比例的增長,血游離脂肪酸升高及腸促胰島素效應(yīng)的受損。血游離脂肪酸的升高可以造成多種細胞功能和活性的損傷,在糖代謝異常方面發(fā)揮著重要的作用。在研究體外游離脂肪酸對細胞損傷的相關(guān)機制方面,較常用的物質(zhì)為軟脂酸,本實驗旨在觀察

2、軟脂酸對人源性GLP-1分泌細胞活性的影響,并探討其對L細胞脂質(zhì)代謝通路酶的影響。
　　方法:
　　將人源性GLP-1分泌細胞(NCI-H716)在含有10％胎牛血清、1%青/鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng),實驗前一天將細胞接種到鋪有基質(zhì)膠的培養(yǎng)板中誘導(dǎo)分化,24小時后分組及處理如下:
　　1、不同濃度、不同時間軟脂酸干預(yù)對NCI-H716細胞活性的影響:不含軟脂酸的對照組(NC組)和軟脂酸干預(yù)組:PL組(0.1

3、25mM)、PM組(0.25mM)、PH組(0.5mM),在干預(yù)后的4小時、24小時和48小時CCK法檢測細胞活性。
　　2、不同濃度軟脂酸干預(yù)NCI-H716細胞48小時,RT-PCR檢測軟脂酸對L細胞脂質(zhì)代謝通路酶:脂肪酸合成酶(FAS)、二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶-1(DGAT1)、肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶-1(CPT-1)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)的mRNA表達的影響。
　　結(jié)果:
　　1、軟脂酸干預(yù)4h時,PM組、PH

4、組與NC組相比細胞活性分別下降了13%(P<0.05)、53%(P<0.01),PL組與NC組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義;而軟脂酸干預(yù)24h及48h,三個干預(yù)組細胞活性分別下降了52%和68%、72%和76%、77%和79%(與對照組相比較P值均<0.01)。
　　2、RT-PCR結(jié)果顯示:軟脂酸干預(yù)48h,PL、PM、PH組ACCmRNA的表達與NC組相比分別下降了11%(P>0.05)、18%(P<0.05)、37%(P<0.01)

5、,CPT-1mRNA的表達分別上升了28%(P>0.05)、77%(P<0.01)、100%(P<0.01),FASmRNA的表達有下降的趨勢,但各組間統(tǒng)計無差異,DGAT1mRNA的表達在各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1、軟脂酸能夠損傷人源性GLP-1分泌細胞的活性,并且這一現(xiàn)象是濃度依賴性的;
　　2、軟脂酸引起人源性GLP-1分泌細胞內(nèi)脂質(zhì)代謝酶ACC、CPT-1mRNA表達的改變,這些改變可能參與了