綠原酸及凍干制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性的研究和綠原酸精制品結(jié)構(gòu)確證.pdf

1、綠原酸(chlorogenicacid)，化學(xué)名為-O-咖啡?？鼘幩?3-caffeoylquinicacid)，是由咖啡酸(caffeicacid)和奎尼酸(quinicacid)縮合的縮酚酸，又名咖啡鞣酸。是植物在有氧呼吸過(guò)程中經(jīng)桂皮酸途徑(cinnamicacidpathway)所產(chǎn)生的一類(lèi)苯丙素類(lèi)化合物，是許多中藥材(如金銀花、杜仲、咖啡豆、茵陳、苧麻等)的有效成分。 綠原酸具有抗菌消炎、抗癌、抗艾滋病、保肝利膽、抗氧化

2、劑和抑制自由基作用。由于綠原酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)中具有多酚羥基結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)中咖啡酸和奎寧酸又通過(guò)酯鍵相連等原因，使得綠原酸的提取非常困難，2003年以前國(guó)內(nèi)外只有少數(shù)公司僅能在實(shí)驗(yàn)室提供克級(jí)產(chǎn)品，價(jià)格極其昂貴，直接將純品進(jìn)行醫(yī)藥研究很困難。2001年以來(lái)四川九章生物化工科技發(fā)展有限公司經(jīng)過(guò)多年攻關(guān)，于2003年取得成功，成為了國(guó)內(nèi)首家可大規(guī)模生產(chǎn)高純度綠原酸廠(chǎng)家，批量生產(chǎn)的綠原酸純度可達(dá)98％以上。通過(guò)委托四川大學(xué)華西藥學(xué)院進(jìn)一步的研究，將其開(kāi)發(fā)

3、成能夠供臨床使用的國(guó)內(nèi)創(chuàng)新藥注射用綠原酸。 本文擬在確證綠原酸精制品化學(xué)結(jié)構(gòu)；建立和研究綠原酸原料和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；考察綠原酸原料和制劑的穩(wěn)定性。采用四大譜技術(shù)(UV、IR、MS、NMR(1H-NMR、13C-NMR、DEPT-13C-NMR、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC)，結(jié)合元素分析、熱重分析、差熱分析、X-衍射等技術(shù)對(duì)綠原酸化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證； 采用氣相色譜法建立本品原料有機(jī)殘留量檢查法，色譜條件為：色譜柱

4、：PEG-20M(30m×0.53mm,1μm液膜)；柱溫：70℃；進(jìn)樣和汽化溫：150℃；流速(N2)：0.3ml/min；尾吹：70ml/min；氫氣：50ml/min；空氣：400ml/min；檢測(cè)器：FID；采用高效液相色譜法建立綠原酸原料和制劑含量測(cè)定方法和有關(guān)物質(zhì)檢查方法，色譜條件為：ODS(250mm×4.6mmi.d，5μm)為分析柱；乙腈-水-H3PO4(15：85：0.1)(pH=2.27)為流動(dòng)相，于UV323nm

5、處檢測(cè)。所建立的方法原料和制劑分別在1.5μg/ml～80μg/ml的范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9998～0.9999)，最低檢出量為0.0204ng(S/N≥3)，回收率、重現(xiàn)性、中間精密度、重復(fù)性RSD原料和制劑分別為100.4％、1.29％、1.11％、0.54％和100.5％、0.96％、0.60％、1.0％。 經(jīng)過(guò)對(duì)三批本品原料和制劑進(jìn)行測(cè)定，原料有機(jī)殘留溶劑(甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯)均符合國(guó)家和國(guó)際ICH對(duì)殘留

6、溶劑的相關(guān)規(guī)定。三批綠原酸原料含量分別為：99.88％、101.7％、100.9％和三批制劑標(biāo)示百分含量分別為：99.31％、100.5％、99.71％。經(jīng)穩(wěn)定性考察研究，本品原料對(duì)光較敏感、具有一定的吸濕性、對(duì)熱相對(duì)穩(wěn)定；本品凍干制劑對(duì)光、熱較穩(wěn)定；18個(gè)月的室溫留樣考察，本品及凍干制劑較穩(wěn)定。 經(jīng)上述結(jié)構(gòu)鑒定方法確證本品與綠原酸的結(jié)構(gòu)一致。原料有機(jī)殘留溶劑檢查符合國(guó)家和國(guó)際ICH對(duì)殘留溶劑的相關(guān)規(guī)定。原料和制劑有關(guān)物質(zhì)經(jīng)自身