消癌平制劑及其綠原酸單體的藥動(dòng)學(xué)研究與質(zhì)量控制.pdf

1、消癌平片和消癌平注射液均為植物通關(guān)藤的單味制劑,具有抗癌、消炎、平喘等功效,綠原酸為其中的有效成分之一。研究消癌平制劑的質(zhì)量控制方法,比較綠原酸單體及制劑在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)規(guī)律,可以為評(píng)價(jià)消癌平制劑的質(zhì)量提供方法,并為深入研究消癌平的藥效學(xué)提供理論依據(jù)。
　　 第一部分HPLC法測(cè)定消癌平片和消癌平注射液中綠原酸的含量
　　 目的:
　　 建立測(cè)定消癌平片和消癌平注射液中綠原酸含量的HPLC法
　　

2、 方法:
　　 色譜柱為Diamonsil(R)(鉆石)C18柱(250min×4.6mm,5μm);流動(dòng)相為0.2％磷酸-甲醇(65:35);流速為1ml·min-1;內(nèi)標(biāo)為替硝唑;檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm;室溫;20μl進(jìn)樣。
　　 結(jié)果:
　　 在2.22μg·ml-1～96.2μg·ml-1的范圍內(nèi)綠原酸濃度與綠原酸峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,線性方程為Y=0.0892X+0.0539(n=

3、5),r=0.9999,方法精密度好,RSD(n=5)為1.72％;方法的回收率為99.9％～103.7％;供試品溶液在分析濃度下,24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。
　　 結(jié)論:
　　 建立了測(cè)定消癌平片和消癌平注射液中綠原酸含量的HPLC法,該法靈敏度高,專屬性強(qiáng),適用于消癌平制劑的含量測(cè)定。
　　 第二部分消癌平注射液指紋圖譜的建立
　　 目的:
　　 建立消癌平注射液HPLE指紋圖譜分析方法。
　

4、　 方法:
　　 色譜柱:Diamonsil(R)(鉆石)C18柱(250min×4.6mm,5μm),以A(甲醇):B(磷酸鹽緩沖液)為流動(dòng)相,梯度洗脫(0.00～10.00min,0→5％B;12.00～30.00min,5％→20％B:32.00～80.00min,20％→45％B),流速1.0mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)327nm,柱溫25℃,進(jìn)樣量20μL。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)》(2004年A版)軟件,計(jì)算

5、10批消癌平注射液HPLC指紋圖譜的相似度。
　　 結(jié)果:
　　 在消癌平注射液中檢測(cè)到9個(gè)共有指紋峰,各峰分離度良好,以綠原酸峰為參照物峰,各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均符合要求。
　　 結(jié)論:
　　 所建立的HPLC指紋圖譜方法具有較好的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性,可用于消癌平注射液的質(zhì)量控制。
　　 第三部分綠原酸血藥濃度的HPLC測(cè)定法
　　 目的:
　　 建立大鼠

6、血清中綠原酸的HPLC分析方法,為綠原酸的藥代動(dòng)力學(xué)研究提供檢測(cè)技術(shù)。
　　 方法:
　　 采用迪馬DiamonsilC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm):流動(dòng)相為0.2％磷酸-甲醇(65:35),流速為1.0ml·min-1.替硝唑?yàn)閮?nèi)標(biāo);檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm。取大鼠血清樣品,加入內(nèi)標(biāo),以甲醇去蛋白,0.22μm微孔濾膜過濾,37℃水浴揮干,固體殘留物用100μl流動(dòng)相溶解,20μl進(jìn)樣。
　　 結(jié)果

7、:
　　 線性方程為Y=0.4058X+0.9881(r=0.9997),在0.45μg-112μg范圍內(nèi),線性關(guān)系良好,該分析方法檢測(cè)限為0.0018μg,最低定量限為0.0062μg,高、中、低三種不同濃度血清樣品平均回收率分別為98.55％、104.95％、83.24％,精密度實(shí)驗(yàn)RSD值分別為3.83％,2.29％,3.07％,重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD值分別為4.64％,1.26％,1.58％。血清中綠原酸在-20℃冷凍避光條件

8、下30天內(nèi)穩(wěn)定性較好。
　　 結(jié)論:
　　 建立了測(cè)定大鼠血清中綠原酸含量的HPLC分析方法,該法靈敏度好,專屬性強(qiáng),能夠?yàn)榫G原酸的藥動(dòng)學(xué)研究提供方法支持。
　　 第四部分消癌平制劑及其綠原酸單體的藥動(dòng)學(xué)研究
　　 目的:
　　 研究大鼠在灌胃和尾靜脈注射綠原酸單體和消癌平制劑后綠原酸在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征,探討消癌平制劑中其他成分對(duì)綠原酸代謝的影響,闡明綠原酸的藥動(dòng)學(xué)變化規(guī)律。
　　 方

9、法:
　　 (1)綠原酸組:Wistar大鼠60只,體重180～220g,隨機(jī)分為6組,每組10只(♂5只,♀5只)。灌胃單次給綠原酸40mg·kg-1、20mg·kg-1、10mg·kg-1,于給藥后10min、30min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、24h尾尖取血0.5ml;尾靜脈單次注射綠原酸40mg·kg-1、20mg·kg-1、10mg·kg-1,于給藥后5min、10min、20min、30min

10、、45min、60min、90min.、120min、180min、240min于尾尖取血約0.5ml,測(cè)定綠原酸含量。(2)消癌平組:Wistar大鼠20只,體重180～220g,隨機(jī)分為2組,每組10只(♂5只,♀5只),其中一組灌胃單次給消癌平溶液20ml·kg-1(相當(dāng)于CGA20mg·kg-1),于給藥后10min、30min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、24h尾尖取血0.5ml。另外一組尾靜脈單次給消癌平

11、注射液2.5ml·kg-1(相當(dāng)于CGA20mg·kg-1),于給藥后5min、10min、20min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min于尾尖取血約0.5ml,測(cè)定綠原酸含量。(3)采用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù),以最佳房室模型為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算每只大鼠的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)大鼠灌胃綠原酸和消癌平片后,三個(gè)劑量組在0-24h的血清中均未能檢測(cè)出C

12、GA。(2)尾靜脈注射高、中、低三種劑量后,綠原酸在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為均符合二室模型。主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:①iv.40mg·kg-1組:t1/2alpha=19.781min,t1/2beta=68.377min,Vc=0.847L·kg-1·min-1,CL(s)=0.029L·kg-1·h-1;②iv.20mg·kg-1組:t1/2alpha=15.221min,t1/2beta=59.458min,Vc=0.446L·kg-1·m

13、in-1,CL(s)=0.017L·kg-1·h-1;③iv.10mg·kg-1組:t1/2alpha=7.878min,t1/2beta=56.783min,Vc=0.257L·kg-1·min-1,CL(s)=0.012L·kg-1·min-1。(3)靜脈注射消癌平注射液后藥動(dòng)學(xué)行為符合二室開放模型,主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為:t1/2alpha=12.559min,t1/2beta=48.283min,Vc=0.403L·kg-1·min-

14、1,CL(s=0.018L·kg·h-2。
　　 結(jié)論:
　　 大鼠灌胃給綠原酸和消癌平片后,血清中均未能檢測(cè)出CGA。大鼠靜脈注射綠原酸后,起始階段血藥濃度下降迅速,分布相半衰期tlaalpha小于20min,消除相半衰期t1/2beta約為1h,高劑量組的消除半衰期t1/2beta明顯高于低劑量組,表觀分布容積Vc和總清除率CL(s)與給藥劑量呈正相關(guān),隨給藥劑量的增加,藥物在組織與細(xì)胞中的濃度增大,機(jī)體對(duì)藥物的清除