苦參素對Wistar大鼠EAE的防治作用及機制探討.pdf

1、目的:
　　 觀察苦參素(matrine,MAT)對Wistar大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的臨床表現(xiàn)、脊髓組織病理學改變及發(fā)病過程中一氧化氮(nitric oxide,NO)／誘導型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)系統(tǒng)的表達,白介素-17(interleukin-17,IL-17)

2、／白介素-23(interleukin-23,IL-23)炎性軸的影響,初步探討其對EAE的防治作用及可能的機制,為開發(fā)多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis,MS)新的治療途徑和方法提供有意義的基礎(chǔ)實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、模型建立:應(yīng)用豚鼠全脊髓勻漿(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH)+完全弗氏佐劑(complete freund adjuvant,

3、CFA)制成的抗原乳劑,免疫Wistar大鼠建立EAE模型。免疫后每天觀察大鼠的活動情況,測量體重、記錄神經(jīng)功能學評分。
　　 2、實驗動物分組及給藥:將40只清潔級雌性Wistar大鼠隨機分為4組——正常對照組(N)、EAE模型組(M)、MAT高劑量組(MAT-H)、MAT低劑量組(MAT-L)。正常對照組和模型組自免疫當日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1生理鹽水注射液(normal saline,NS),連續(xù)注射16天；

4、MAT高劑量組自免疫當日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1(200mg·kg-1)苦參素注射液,連續(xù)給藥16天；MAT低劑量組自免疫當日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1(150mg·kg-1)苦參素注射液,連續(xù)給藥16天。
　　 3、樣本采集:實驗大鼠在免疫后第17天眼眶后靜脈叢采血法取血,分離血清備用；并于心臟灌流后取脊髓腰膨大置于4％多聚甲醛中固定,石蠟包埋、切片。
　　 4、指標檢測:蘇木素-伊紅(HE)和變

5、色酸-2R-亮綠(C-2R-BG)染色觀察脊髓組織病理學改變,硝酸酶還原法測定EAE大鼠血清中No的表達,免疫組織化學法和RT-PCR法分別檢測脊髓中iNOS及其mRNA的表達,雙抗夾心ELISA法檢測血清中IL-17、IL-23的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠發(fā)病率、體重和臨床評分變化:正常組無動物發(fā)??；MAT-H組、MAT-L組動物發(fā)病率低于模型組(P<0.05)；MAT-H組動物發(fā)病率低于MAT-L組發(fā)病率(

6、P>0.05)。正常組動物在實驗期間體重持續(xù)上升,MAT-H組、MAT-L組、模型組大鼠平均體重變化呈下降趨勢；與模型組相比較,MAT-H組、MAT-L組的體重變化較小(P<0.05)；MAT-H組與MAT-L組間體重變化差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與MAT-H組、MAT-L組動物比較,模型組的平均神經(jīng)功能評分顯著升高(P<0.05)；MAT-H組與MAT-L組間神經(jīng)功能學評分差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 2、

7、組織病理學觀察:正常組動物脊髓內(nèi)無炎性細胞浸潤與髓鞘脫失,模型組、MAT-H組、MAT-L組動物脊髓內(nèi)均存在炎性細胞浸潤與髓鞘脫失；與模型組相比,MAT-H組、MAT-L組大鼠脊髓炎性細胞浸潤與髓鞘脫失有所減輕(P<0.01)；MAT-H組炎癥浸潤細胞與髓鞘脫失比MAT-L組少(P>0.05)。
　　 3、血清中NO含量的變化:與正常組比較,模型組、MAT-H組、MAT-L組大鼠血清NO表達水平升高(P<0.05)；與模型組相比

8、,MAT-H組、MAT-L組大鼠血清NO表達水平降低(P<0.01)；但MAT-H組與MAT-L組大鼠血清NO表達水平無顯著差異(P>0.05)。
　　 4、脊髓中iNOS及其mRNA的表達:與正常組比較,模型組、MAT-H組、MAT-L組大鼠脊髓iNOS及其mRNA表達水平升高(P<0.05):與模型組相比,MAT-H組大鼠脊髓iNOS表達水平降低(P<0.01),脊髓中iNOsmRNA在MAT-H組、MAT-L組表達水平也降

9、低(P<0.05)；但MAT-H組與MAT-L組大鼠脊髓中iNOSmRNA表達水平無顯著差異(P>0.05)。
　　 5、血清中IL-17、IL-23的表達:與正常組比較,模型組、MAT-H組、MAT-L組大鼠血清IL-17、IL-23表達水平升高(P<0.01)；與模型組相比,MAT-H組大鼠血清IL-17、IL-23表達水平降低(P<0.01),MAT-L組表達水平也降低(P<0.05)；但MAT-H組與MAT-L組大鼠血清