咪喹莫特對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和膠原產(chǎn)生、以及CTGF和TP表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】1.分別在細(xì)胞、蛋白水平上檢測咪喹莫特對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和I、Ⅲ型前膠原產(chǎn)生的影響；2.在藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)中觀察咪喹莫特對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞CTGF和TP表達(dá)的影響，進(jìn)而探討咪喹莫特的作用途徑與機(jī)制。 【方法】取手術(shù)切除的瘢痕疙瘩組織作成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)，取其第3～6代生長狀態(tài)良好且處于對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)加入不同濃度的咪喹莫特，并設(shè)正常對照組，于光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；MTT法檢測成纖維

2、細(xì)胞的活性；免疫組化和蛋白免疫印跡法檢測瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞I型、Ⅲ型前膠原、CTGF和TP的表達(dá)情況。 【結(jié)果】1.光鏡下結(jié)果：瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞在用咪喹莫特作用后形態(tài)上發(fā)生了明顯變化，細(xì)胞呈明顯的抑制及凋亡征象。 2.MTT結(jié)果：咪喹莫特能抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖，且存在劑量和時(shí)間依賴性，在10μg/ml～100μg/ml范圍內(nèi)變化尤為顯著。 3.免疫組化結(jié)果：(1)咪喹莫特作用后瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞I、Ⅲ型

3、前膠原表達(dá)減弱。(2)咪喹莫特作用后瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞CTGF表達(dá)減弱。(3)咪喹莫特作用前后瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TP表達(dá)無明顯差異。 4.蛋白免疫印跡法結(jié)果：(1)咪喹莫特作用后瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞I、Ⅲ型前膠原表達(dá)減弱。(2)咪喹莫特作用后瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞CTGF表達(dá)減弱。(3)咪喹莫特作用前后瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TP表達(dá)無明顯差異。 【結(jié)論】1.咪喹莫特能有效抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖和I、Ⅲ型前膠原的產(chǎn)生，防治瘢痕