鼻咽癌患者γδT細胞殺瘤活性及Vδ亞型的研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文鼻咽癌患者γδT細胞殺瘤活性及Vδ亞型的研究姓名：王小路申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科指導(dǎo)教師：張連山何維2003.4.1!里塑塑堡型查堂墮主堂堡絲蘭!莖蘭塑莖：堅：獲得的y6T細胞進行免疫熒光抗體染色流式細胞儀純度分析，及亞型進行分析，并對增殖特點進行了觀察；采用組織塊培養(yǎng)法對從實體瘤中獲得的腫瘤細胞進行了體外原代培養(yǎng)，同時進行了免疫組織化學(xué)鑒定，裸鼠皮下種植；在不同效靶比條件下，用MTT法測定了正常人

2、外周血和鼻咽癌患者外周血的Y6T細胞對同種異體鼻咽癌細胞系CNEl，CNE2，和新建傳代培養(yǎng)的鼻咽癌細胞，及daudi細胞的細胞毒活性；通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)在轉(zhuǎn)錄水平測定了體外擴增的正常人外周血，鼻咽癌患者外周血v6T細胞及腫瘤浸潤部位75T細胞的TCRV6主要亞型(V61、V62和V63)表達。結(jié)果：通過固相抗體法分離擴增得到了來源于正常人外周血，鼻咽癌患者的外周血的yST細胞(選擇擴增于外周血單個核細胞)年H75T

3、IL(選擇擴增于腫瘤浸潤淋巴細胞)，擴增純度在四周內(nèi)最高可達到97％，細胞數(shù)量可達到108。但不同組織來源的yST細胞擴增到一定純度所需時間有所差別。其擴增純度達到7070左右的時間順序為：外周血y3T細胞最快，約14天左右，均達82％以上；75TIL所需時間較長，約30天左右。在yST細胞擴增的同時，進行了原代鼻咽癌細胞的同步培養(yǎng)，經(jīng)鑒定，體外擴增得到的腫瘤細胞為高純度的鼻咽癌細胞：通過y4J】5T細胞體外細胞毒活性的進一步研究發(fā)現(xiàn)擴