網(wǎng)狀玻璃碳聯(lián)合犬骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及體內(nèi)組織相容性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過體外實(shí)驗(yàn)明確網(wǎng)狀玻璃碳無毒性且有利于細(xì)胞生長(zhǎng)，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)將網(wǎng)狀玻璃碳植入股骨大轉(zhuǎn)子6周、12周后采用組織病理切片，masson染色觀察骨組織與網(wǎng)狀玻璃碳的組織相容性。
　　方法：體外實(shí)驗(yàn)：提取犬的股骨干遠(yuǎn)端的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，采用差數(shù)貼壁和培養(yǎng)基選擇法提取骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，在體外培養(yǎng)傳代，取第3代細(xì)胞系通過細(xì)胞流式分析法進(jìn)行細(xì)胞鑒定。通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)網(wǎng)狀玻璃碳的細(xì)胞毒性。取第3代細(xì)胞，以2.0×109 L-1的

2、細(xì)胞濃度種植在網(wǎng)狀玻璃碳表面，聯(lián)合培養(yǎng)14d后觀察細(xì)胞的黏附與增殖情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：選取犬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，手術(shù)切開暴露股骨大轉(zhuǎn)子，用鉆頭從股骨頸長(zhǎng)軸與股骨外側(cè)交點(diǎn)沿著股骨頸方向鉆孔到達(dá)軟骨下4-5mm處后植入網(wǎng)狀玻璃碳，在術(shù)后6周、12周分批將犬處死，取植入材料的大轉(zhuǎn)子處標(biāo)本，采用固定、脫鈣液脫鈣，做病理切片，行masson染色觀察骨組織及結(jié)締組織在網(wǎng)狀玻璃碳的長(zhǎng)入情況。
　　結(jié)果：(1)倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示：網(wǎng)狀玻璃碳聯(lián)合犬骨髓基質(zhì)

3、干細(xì)胞培養(yǎng)7天后材料近周細(xì)胞較少，材料外圍有較多的細(xì)胞黏附生長(zhǎng)；14天后細(xì)胞逐漸向支架材料靠近，材料表面及材料各個(gè)空隙內(nèi)都有大量的細(xì)胞黏附，并有少量的細(xì)胞基質(zhì)分泌；21天后細(xì)胞大量增殖，連接成片，填充在材料表面及空隙內(nèi)，并有大量的細(xì)胞基質(zhì)分泌，部分細(xì)胞出現(xiàn)接觸性抑制。(2)掃描電鏡觀察結(jié)果顯示：細(xì)胞與材料共同培養(yǎng)14天后，細(xì)胞大多呈梭形，部分為多角形，延展性良好，細(xì)胞周圍有大量細(xì)胞外基質(zhì)，少量細(xì)胞伸出偽足黏附于材料表面及空隙中。(3)體