2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察Neuritin表達降低對Neuralized介導(dǎo)的Notch信號途徑的影響,探討Neuritin在神經(jīng)再生及神經(jīng)系統(tǒng)可塑性中的作用機制。
   方法:
   (1)Neuritin高表達細胞株的篩選:應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測293T細胞及L-02細胞中neuritin基因的表達水平。
   (2)PBS/U6-neuritin siRNA(1-3)表達載體的構(gòu)建:應(yīng)用基因工程的方法以PBS/U6為空載

2、體,通過兩步法構(gòu)建PBS/U6-neuritin siRNA干擾質(zhì)粒。
   (3)PBS/U6-neuritin siRNA干擾質(zhì)粒的鑒定:PBS/U6-neuritin siRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Neuritin高表達細胞株,Western-blot檢測細胞中Neuritin的表達,鑒定干擾載體的干擾效率。
   (4)Neuritin siRNA對Notch信號途徑配體Jaddeg1蛋白表達水平的影響:利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法

3、共轉(zhuǎn)染pIRES-HA-JAG1與PBS/U6-neuritin siRNA-(1-3)與293T細胞中,Western-blot檢測Neuritin蛋白表達降低時,Jaddeg1蛋白的表達水平。
   (5)Neuritin siRNA對Jaddge1蛋白內(nèi)吞的影響:利用細胞內(nèi)熒光定位技術(shù)觀察細胞內(nèi)Neuritin蛋白表達降低時,Jaddge1蛋白的內(nèi)吞情況。
   結(jié)果:
   (1)RT-PCR結(jié)果顯示:N

4、euritin蛋白在293T細胞及L-02細胞中高表達,選擇293T細胞為實驗細胞株。
   (2)載體構(gòu)建及干擾效率鑒定結(jié)果:PBS/U6-neuritin siRNA1-3載體經(jīng)測序鑒定后,Western-blot結(jié)果顯示neuritin干擾質(zhì)??墒?93T細胞內(nèi)源性Neuritin表達降低。
   (3)Neuritin siRNA對Jaddeg1蛋白表達水平的影響:Western-blot結(jié)果顯示,阻斷Neuri

5、tin的表達,細胞中Jaddeg1蛋白表達水平下調(diào)。
   (4)Neuritin siRNA對Jaddge1蛋白內(nèi)吞的影響:Neuritin蛋白表達降低引起Jaddeg1蛋白內(nèi)吞增加。
   結(jié)論:
   (1)Neuritin蛋白表達降低可以導(dǎo)致Notch信號途徑配體Jaddeg1蛋白的表達下調(diào)。
   (2)Neuritin蛋白表達下調(diào)可使Jaddeg1蛋白的內(nèi)吞增加。
   綜上所述:Ne

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