農(nóng)田中洋蔥伯克氏菌基因型及其與醫(yī)院同類致病菌的比較研究.pdf

1、本研究從廣西、浙江、海南、河北4省共采集農(nóng)田灌溉水和土壤樣本43份，用選擇培養(yǎng)基Bcc富集液分離Bcc菌株，經(jīng)表型特征鑒定后確定所分離的細(xì)菌菌株中有26個(gè)為Bcc菌株。從遼寧、浙江2省的醫(yī)院獲取并用表型特征鑒定Bcc菌株41個(gè)。研究表明Biolog和脂肪酸分析(FAMEs)均只能將Bcc鑒定到種的水平，而無法鑒定到基因型。 由于各基因型Bcc菌株間同源性極高，常用的細(xì)菌分子鑒定手段16SrRNA基因序列比較無法區(qū)分各基因型。本研

2、究采用recA基因區(qū)分Bcc各基因型菌株，同時(shí)比較了recA特異引物PCR擴(kuò)增和recA全序列分析的方法與表型鑒定方法的差異，經(jīng)表型鑒定方法定為Bcc的67個(gè)菌株中只有59個(gè)被確證為Bcc菌株，其中農(nóng)田菌株25個(gè)，醫(yī)院菌株34個(gè)，Biolog和FAMEs對Bcc菌的誤鑒定率為11.94％。農(nóng)田菌株中檢測到基因型Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ，其中基因型Ⅰ為優(yōu)勢類型，其次是基因型Ⅴ；醫(yī)院菌株中檢測到基因型Ⅰ、Ⅱ、ⅢA、ⅢD和Ⅴ，其中基因型ⅢA為優(yōu)勢類型，

3、它是引起洋蔥伯克氏綜合癥的主要基因型，但同時(shí)也發(fā)現(xiàn)醫(yī)院存在較高比率的基因型Ⅰ菌。recA特異引物PCR擴(kuò)增法是針對醫(yī)院Bcc菌株的基因型鑒定設(shè)計(jì)的，該法操作簡便、準(zhǔn)確率較高可以作為初步鑒定Bcc基因型的主要手段，但是由于一些基因型recA特異引物的缺少(如基因型Ⅸ)和對農(nóng)田菌株靈敏度不夠高(如基因型Ⅱ)，因此recA全序列分析是鑒定和確證Bcc基因型不可或缺的手段。研究還表明一些菌株的基因型與其在TSA平板上的菌落特征有一定的對應(yīng)關(guān)系，

4、通?；蛐廷窬昃渚鶠辄S綠色、基因型Ⅳ菌落接近無色、基因型Ⅲ的菌落多為乳白色。 對農(nóng)田優(yōu)勢基因型—基因型Ⅰ菌株與醫(yī)院基因型Ⅰ菌株進(jìn)行了區(qū)分，結(jié)果顯示，兩者在recA基因的限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP)、recA基因全序列分析及煙草過敏反應(yīng)中無差異；而利用模式植物苜蓿替代動物模型對動物毒性的檢測可以明確區(qū)分開基因型Ⅰ農(nóng)田菌株和醫(yī)院菌株，這為我們在農(nóng)業(yè)和環(huán)保中安全利用Bcc奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。本研究利用模式植物苜蓿對不同來源的

5、基因型Ⅰ菌株進(jìn)行區(qū)分，這是國內(nèi)外的首次嘗試并獲得成功，但其中的作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。 利用所建立的苜蓿植物模型代替動物模型在國內(nèi)首次開展農(nóng)田B.cepacia不同基因型菌株對動物毒性的測定，發(fā)現(xiàn)分離到的農(nóng)田菌株對動物的毒性明顯弱于醫(yī)院菌株。除LMG1222(洋蔥酸皮病菌)外所有參試基因型Ⅰ農(nóng)田菌株、基因型Ⅱ和Ⅳ菌株對苜蓿致病率與清水對照(CK)差異未達(dá)極顯著水平；所有基因型Ⅰ醫(yī)院菌株及基因型Ⅲ醫(yī)院菌株對苜蓿致病率與CK差異極顯