硫芥遺傳毒作用及其分子機制的實驗研究.pdf

1、硫芥是重要的化學(xué)戰(zhàn)劑之一，屬糜爛性毒劑。是一種典型的雙功能烴化劑，能使DNA形成交聯(lián)，導(dǎo)致DNA結(jié)構(gòu)及其信息發(fā)生改變，不僅可產(chǎn)生細胞毒作用，也可產(chǎn)生遺傳毒和生殖毒作用，具有遠期危害，其危害方式及危害程度需要深入研究加以闡明。本文從染色體畸變、基因突變的遺傳學(xué)終點，以微生物、哺乳動物細胞、整體動物為指示生物，體內(nèi)試驗與體外實驗相結(jié)合，運用Ames、CA、MNT、SCG、顯微鏡鏡檢、微孔培養(yǎng)、RT-PCR以及電泳分析、測序等技術(shù)，系統(tǒng)的研究

2、了硫芥的致突變作用及其對小鼠淋巴瘤L5178Y細胞處理后的細胞懸浮生長率、tk基因突變頻率的影響及誘導(dǎo)tk基因的分子突變譜。同時以小鼠精子畸形試驗、睪丸組織病理形態(tài)學(xué)觀察以及小鼠致畸試驗研究了硫芥對生殖系統(tǒng)的損傷作用，從細胞水平及分子水平系統(tǒng)地研究了硫芥的遺傳毒作用，進一步闡明了硫芥的遺傳毒理學(xué)基本特征，并初步探討了GSH對細胞的保護作用及正常大鼠脾淋巴細胞和L5178Y小鼠淋巴瘤細胞在硫芥染毒后GSTs活性的變化，為硫芥的遠期危害評價

3、以及可能的致腫瘤作用機制提供了一定的實驗依據(jù)。主要結(jié)論如下：1.硫芥為明確的致突變物，有明確的誘變作用。以Ames、CA、MNT、SCG配套進行硫芥的誘變試驗檢測，結(jié)果均為陽性。 2.硫芥是小鼠雄性生殖細胞遺傳損傷的誘變劑，可引起小鼠睪丸嚴重的生精細胞結(jié)構(gòu)損傷。硫芥染毒后，小鼠體重降低，活動能力減弱，精子畸形率增高，有劑量依賴關(guān)系(P＜0.01)。小鼠睪丸曲細精管內(nèi)各級精細胞稀少和缺失，細胞出現(xiàn)空泡變性和水腫，核變形，染色質(zhì)凝聚

4、，核漿分離及壞死脫落。 3.硫芥對KM小白鼠有致畸性。硫芥染毒后孕鼠體重增長受抑，在0.2～5.0mg范圍內(nèi)對孕鼠的生殖能力及胎鼠體重和胎盤重量沒有明顯影響；對胎鼠外觀的影響主要表現(xiàn)為血腫；對胎鼠骨骼的影響主要表現(xiàn)為椎體缺失、胸骨二分骨化、胸骨殘余、椎弓分離、頸肋等。 4.硫芥在10～30μmol/L劑量范圍內(nèi)對L5178Y細胞具有較強的細胞毒性，能夠誘導(dǎo)L5178Y細胞tk基因發(fā)生突變。隨染毒劑量增加，細胞接種效率(P

5、E)、相對存活率(RS)、相對懸浮增長率(RSG)、總相對增長率(RTG)均相應(yīng)下降，而突變頻率(MF)隨之增加，硫芥誘發(fā)的突變頻率是自發(fā)突變頻率的2～15倍，觀察到大集落(1argecolony)和小集落(smallcolony)兩種表型的突變集落，以小集落為主。對硫芥誘導(dǎo)的L5178Y細胞TFT抗性克隆的cDNA進行了序列分析，共檢測到34處點突變，以堿基置換(67.6％，23/34)為主，32.4％為移碼突變(11/34)。堿基置

6、換又以顛換為主(64.7％，22/34)，所檢測的標(biāo)本均在434位點出現(xiàn)了G→T的顛換，其次為629位點T→G顛換，共出現(xiàn)8次，再次為912位點-C移碼，出現(xiàn)2次。這些結(jié)果是首次報導(dǎo)，還需要進一步研究驗證。 5.GSH可部分對抗硫芥對CHL細胞DNA的損傷，對細胞有保護作用。GSTs可能在硫芥致突致癌效應(yīng)中發(fā)揮著一定作用。硫芥對大鼠脾淋巴細胞和小鼠淋巴瘤L5178Y細胞GSTs活力的影響均呈現(xiàn)低劑量誘導(dǎo)而高劑量抑制的趨勢。對大鼠