發(fā)作性運動障礙患者MR-1、SLC2A1基因突變篩查及PRRT2基因篩查陰性的患者拷貝數(shù)變異分析.pdf

1、【目的】
　　在發(fā)作性運動障礙(Paroxysmal Dyskinesias,PD)人群中篩查肌成纖維生成調節(jié)因子1(myofibrillogenesis regulator1,MR-1)、溶質載體家族2(促葡萄糖轉運)成員1(solute carrier family 2(facilitated glucose transporter),member 1,SLC2A1)相關致病基因的基因突變,尋找突變位點及SNP位點,并在此兩種

2、基因篩查陰性及富含脯氨酸的跨膜蛋白2(Proline-rich transmembrane protein 2,PRRT2)基因陰性的患者中進行PRRT2基因拷貝數(shù)變異(copy-number variations)篩查,確定CNVs位點,探討我國PD患者中三個基因的致病性,及PRRT2的CNVs與PD臨床表型的關系,為PD患者的基因診斷和臨床研究提供依據(jù),以助遺傳咨詢和臨床治療。
　　【研究對象和方法】
　　收集及隨訪在2

3、004年至2012年就診于廣州醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院癲癇中心的PD患者,整理臨床資料,包括:起病年齡、發(fā)作特征、腦電圖資料、神經(jīng)影像學、藥物治療及家族史,分析其臨床特征。采集患者及家屬外周血DNA,使用PCR和測序技術對MR-1和SLC2A1基因的外顯子區(qū)域以及內含子與外顯子交界處的基因片段進行擴增和測序,然后對此二種基因突變陰性及PRRT2基因篩查陰性的患者通過AccuCopyTM技術對PRRT2基因包含有活性的啟動子區(qū)域及4個編碼蛋白

4、的外顯子區(qū)域和周圍內含子區(qū)域的5個片段設計5個探針,設置3個內參基因進行多重熒光探針競爭性PCR,分析數(shù)據(jù)尋找CNVs位點,并與對照比對,進行相關性分析。并通過實時定量PCR、Long-rangePCR進行缺失位點定位。
　　【結果】
　　篩選的MR-1、SLC2A1兩種相關致病基因發(fā)現(xiàn)PD患者中MR-1基因中突變?yōu)閏.1010G>A,p.Arg320Gln突變檢出率為2％,SLC2A1未見突變,在這些突變篩查陰性的PD患者

5、中進行PRRT2的CNVs分析發(fā)現(xiàn)有2個散發(fā)病例(P3、P15)存在大片段缺失,缺失范圍約1.8Mb,即整個PRRT2基因只存在單個拷貝,其余患者、患者家屬對照組及正常人群均有2個拷貝。在PD患者中發(fā)現(xiàn)PRRT2的CNVs在目前國內外文獻中未見報道。
　　【結論】
　　(1)MR-1、SLC2A1基因突變對本研究篩查的發(fā)作性運動障礙患者的影響不大,MR-1基因突變可存在于正常無臨床癥狀人群中。
　　(2)PRRT2的拷