SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞體外轉(zhuǎn)染為胰島素分泌細胞的實驗研究.pdf

1、目的:1.研究脂肪間充質(zhì)干細胞體外能否被轉(zhuǎn)染成為胰島素分泌細胞。2.研究轉(zhuǎn)染后的脂肪間充質(zhì)干細胞能否穩(wěn)定表達胰島素及其在低糖和高糖環(huán)境下的胰島素分泌情況。
　　方法:1.RT-PCR法擴增人胰島素基因，并構(gòu)建含有人胰島素基因的真核表達重組載體PcDNA3.1-hINS。2.從SD大鼠腹股溝區(qū)獲得皮下脂肪墊，經(jīng)離心消化和貼壁培養(yǎng)獲得脂肪間充質(zhì)干細胞，并通過流式細胞學鑒定CD34、CD44、CD45、CD90、CD106和CD11b的

2、表達。3.瞬時轉(zhuǎn)染，分別收集1d、6d、12d、18d的培養(yǎng)基液，轉(zhuǎn)染后18d行葡萄糖刺激試驗，RT-PCR法測未轉(zhuǎn)染組、空載體組和重組載體組的胰島素mRNA轉(zhuǎn)錄，ELISSA法測未轉(zhuǎn)染組、空載體組、重組載體組和葡萄糖刺激試驗中高糖組與低糖組的胰島素表達，并對其進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果:1.流式細胞學鑒定脂肪間充質(zhì)干細胞:CD44、CD90、CD106表達陽性，CD34、CD45、CD11b表達陰性。2.RT-PCR法測重組載體

3、組均有胰島素mRNA轉(zhuǎn)錄，未轉(zhuǎn)染組和空載體組均無轉(zhuǎn)錄。3.ELISSA法測胰島素分泌量:重組載體組(1d、6d、12d、18d)均與對照組（未轉(zhuǎn)染組）有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)，空載體組與對照組無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)，其中，重組載體組中1d與6d、12d、18d均有統(tǒng)計學差異(p＜0.01)，而6d、12d、18d之間無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)，葡萄糖刺激試驗中高糖組與低糖組無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。
　　結(jié)論:脂肪