大鼠外周神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)前體細(xì)胞的觀察.pdf

1、目的:觀察胚胎、新生和成年大鼠三叉神經(jīng)節(jié)、頸交感神經(jīng)節(jié)和脊髓背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)是否存在神經(jīng)前體細(xì)胞。 方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)灌流后，取胚胎、新生和成年大鼠三叉神經(jīng)節(jié)、頸交感神經(jīng)節(jié)和脊髓背根神經(jīng)節(jié)行冰凍切片，進(jìn)行p75,Nestin免疫組織化學(xué)和Brdu/Nestin，Brdu/p75免疫熒光組織化學(xué)檢測(cè)。另取上述神經(jīng)節(jié)進(jìn)行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，觀察其體外生長(zhǎng)情況。以胎牛血清對(duì)傳代培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行Nestin免疫組織化學(xué)和B

2、rdu免疫熒光鑒定；對(duì)傳代誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行NF、GFAP免疫熒光鑒定。 結(jié)果:在胚胎、新生、成年大鼠的三叉神經(jīng)節(jié)、脊髓背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)均見有Brdu/Nestin，Brdu/p75免疫熒光雙標(biāo)細(xì)胞。取自胚胎和新生大鼠三叉神經(jīng)節(jié)和脊髓背根神經(jīng)節(jié)的細(xì)胞經(jīng)原代培養(yǎng)，呈現(xiàn)Nestin和Brdu免疫熒光陽(yáng)性。培養(yǎng)第三代細(xì)胞加入胎牛血清后出現(xiàn)分化，呈現(xiàn)NF、GFAP免疫熒光陽(yáng)性。 結(jié)論：在胚胎、新生、成年大鼠的三叉神經(jīng)節(jié)、脊髓背根神經(jīng)節(jié)和成

3、年大鼠的頸交感神經(jīng)節(jié)中存在有增殖分裂的神經(jīng)前體細(xì)胞，這些細(xì)胞可以分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。 目的:評(píng)價(jià)疼痛刺激是否會(huì)激發(fā)成年大鼠的脊髓背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)的神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖與分化。 方法:用1﹪福爾馬林注射于大鼠左前掌制造疼痛模型，將疼痛模型分為3天組和7天組，各4只，另設(shè)正常對(duì)照組4只。3組皆連續(xù)給予Brdu標(biāo)記3天，3天后將動(dòng)物分別于不同時(shí)間點(diǎn)處死。對(duì)正常對(duì)照組和模型3天組大鼠的背根節(jié)進(jìn)行Brdu/Nestin免疫熒光雙

4、標(biāo)檢測(cè)，比較疼痛通路上的背根節(jié)內(nèi)，與非疼痛通路上的背根節(jié)和正常組的大鼠背根節(jié)內(nèi)Brdu/Nestin免疫熒光雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)目。模型7天組的疼痛通路上背根節(jié)與非疼痛通路上背根節(jié)行BrdU/NF、Brd/GFAP免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)，比較各組雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)。 結(jié)果:3組大鼠各節(jié)段背根節(jié)內(nèi)都可見到Brdu/Nestin雙標(biāo)細(xì)胞，但疼痛通路上的雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量并未見與非疼痛通路和正常組的雙標(biāo)細(xì)胞數(shù)量有明顯差別。7天組背根節(jié)內(nèi)的BrdU/GFAP雙標(biāo)細(xì)胞