重組雙鏈腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的人類促腎上腺髓質(zhì)素基因?qū)ψ园l(fā)性高血壓大鼠的降壓并防治心、腎并發(fā)癥作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、為了實(shí)現(xiàn)促腎上腺髓質(zhì)素基因在罹患高血壓動物的體內(nèi)長期、穩(wěn)定、安全的表達(dá),從而達(dá)到長期、穩(wěn)定降壓的目的,并觀察它對各種高血壓并發(fā)癥的預(yù)防作用,我們將人類AM基因克隆入重組雙鏈腺相關(guān)病毒載體中,并包裝成病毒顆粒,并經(jīng)過肝素柱純化獲得高滴度的rAAV-D(+)-AM病毒.然后以自發(fā)性高血壓大鼠為模型,分別經(jīng)尾靜脈分別注射rAAV-D(+)-AM(實(shí)驗(yàn)組)和rAAV-D(+)-GFP(對照組)這兩種病毒顆粒(2×10<'10>p.f.u/大鼠,

2、每組6只).注射前及注射后每周監(jiān)測動脈收縮壓,每2周收集24小時(shí)尿.同時(shí)觀察動物行為變化,實(shí)驗(yàn)周期為15周.實(shí)驗(yàn)結(jié)束前經(jīng)右頸總動脈插管,用美國PowerLab公司的心功能測定儀測定大鼠心功能的各項(xiàng)指標(biāo).最后處死動物,并取心、主動脈、肝、腎等組織提取蛋白質(zhì)、總RNA.分別用RT-PCR和ELISA檢測AM mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)和分布情況;檢測尿中微量白蛋白的含量及變化;主要臟器稱重并固定切片作形態(tài)學(xué)分析以觀察腎臟損傷情況和心血管重構(gòu)情況