介孔硅對(duì)O型口蹄疫病毒樣顆粒的吸附和緩釋性能研究.pdf

1、介孔納米二氧化硅顆粒具有小粒徑，高比表面積，大孔容，可調(diào)的孔徑，表面可化學(xué)改性，良好的生物親和性和穩(wěn)定性等優(yōu)異的性質(zhì)，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，已經(jīng)擴(kuò)展應(yīng)用到藥物控制給藥系統(tǒng)，是各種藥物的潛在載體。目前它已經(jīng)廣泛應(yīng)用于運(yùn)載抗癌藥物，生物大分子，多肽，核苷酸，抗生素，難溶藥物等研究之中。其中作為疫苗載體和佐劑是一個(gè)比較新的研究方向之一。理想的疫苗佐劑需要具備安全、有效、靶向和經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，而納米多孔二氧化硅納米顆粒就比較符合疫苗佐劑的要求。因

2、此，納米多孔硅是目前比較的新穎的佐劑材料之一。
　　本實(shí)驗(yàn)采用常用的溶膠-凝膠法合成的介孔納米二氧化硅顆粒，經(jīng)過透射電子顯微鏡分析，介孔二氧化硅顆粒呈現(xiàn)球形，粒徑在400nm左右，分布基本均勻，存在明顯的介孔結(jié)構(gòu)，孔徑2-3納米，介孔材料的特征比較明顯。
　　再利用基因工程技術(shù)將口蹄疫結(jié)構(gòu)蛋白基因連接在載體上，然后導(dǎo)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)和純化出口蹄疫衣殼蛋白，經(jīng)過酶切得到Vp0，Vp3，Vp1三部分，在

3、組裝緩沖液中組裝得到O型口蹄疫病毒樣顆粒，粒徑分析表明其粒徑在20-100納米之間。
　　將介孔納米二氧化硅顆粒溶液與口蹄疫病毒樣顆粒溶液按照一定的比例簡(jiǎn)單混合，吸附一段時(shí)間后離心，再用PBS溶液重懸后免疫動(dòng)物。本實(shí)驗(yàn)設(shè)置了介孔硅納米顆粒和不同含量口蹄疫病毒樣顆粒的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組，并且設(shè)置了弗氏完全佐劑和口蹄疫病毒樣顆粒組成的傳統(tǒng)疫苗作為對(duì)照組，通過對(duì)比來評(píng)價(jià)介孔納米二氧化硅與口蹄疫病毒樣顆粒組成的納米疫苗的免疫效果。
　　疫苗

4、免疫效果評(píng)價(jià)主要是通過體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)采用淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和淋巴細(xì)胞因子含量（IFN-gama）來評(píng)估分析豚鼠免疫細(xì)胞免疫效果，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定O型口蹄疫特異性抗體水平來反應(yīng)豚鼠免疫體液免疫效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)介孔硅和口蹄疫病毒樣顆粒組成的納米疫苗免疫豚鼠能夠引起細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，特別是體液免疫反應(yīng)，可能由于介孔硅對(duì)口蹄疫病毒樣顆粒的緩釋性能好，導(dǎo)致免疫動(dòng)物產(chǎn)生的抗體水平高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。但是與弗氏佐劑和口