應(yīng)用密碼偏好性合成的α2b-干擾素在畢赤酵母中的超表達.pdf

1、干擾素是于1957年發(fā)現(xiàn)的一組天然抗病毒藥物，后來的研究中又發(fā)現(xiàn)了許多不同亞型的干擾素。特別是α2b-人干擾素，它是干擾素家庭中應(yīng)用最為廣泛的成員。Α2b-人干擾素具有廣譜抗病毒作用，抑制腫瘤細胞增殖，增強免疫功能等功能，因而α2b-干擾素被作為治療腫瘤疾病，癌癥和肝炎的潛在治療藥物。畢赤酵母表達系統(tǒng)（Pichia pastoris/pPIZα）因可以在甲醇誘導(dǎo)下進行大體積高密度的連續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)而被廣泛的應(yīng)用于重組蛋白的高表達。然而，最終

2、重組蛋白的產(chǎn)量還受到許多內(nèi)在因素影響。通過調(diào)節(jié)這些因素可以影響目的蛋白的表達量和產(chǎn)物的穩(wěn)定性。近年來，人們通過畢赤酵母系統(tǒng)密碼子偏好性的原理優(yōu)化外源基因的核苷酸序列和G+C含量的方法提高外源蛋白的表達水平。而國內(nèi)還未見利用畢赤酵母系統(tǒng)密碼子的方法提高α2b-人干擾素在畢赤酵母的表達水平的報道。
　　 本文對α2b-人干擾素通過應(yīng)用畢赤酵母密碼子的偏好性和優(yōu)化G+C含量的方法設(shè)計并合成α2b-干擾素基因序列，提高α2b-干擾素在畢

3、赤酵母的表達量。合成的α2b-干擾素克隆到畢赤氏酵母表達載體pPICZαA。重組表達質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切線性化后電轉(zhuǎn)化畢赤酵母（Pichia pastoris）GS115。多拷貝的Mut+工程菌株通過提高抗生素Zeocin含量的平板篩選，120小時誘導(dǎo)表達后，SDS-PAGE分析表明工程菌株GS115/pPICZαA-IFN-α2b的表達量達到了810 mg/L。Western blot 分析表明工程菌分泌表達蛋白的α2b-干擾素具有