散發(fā)性大腸癌DNA甲基化的臨床病理意義及其和遺傳學機制的關系研究.pdf

1、散發(fā)性大腸癌DNA甲基化的臨床病理意義及其和遺傳學機制的關系研究 目的：研究散發(fā)性大腸癌的抑癌基因啟動子甲基化和臨床病理學特征以及遺傳學改變(微衛(wèi)星不穩(wěn)定、染色體不穩(wěn)定以及相關癌基因、抑癌基因表達)的關系，探討表遺傳學檢測的臨床意義以及表遺傳學機制和遺傳學機制之間的相互關系。 方法：對71例散發(fā)性大腸癌(SCRC)采用甲基化特異性PCR的方法行p14*~、hMLHl、p16I~4,、MGMT和MINTl共5個基因啟動子甲

2、基化的檢測，選擇BAT25和BAT26兩個位點進行微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)檢測、進行流式細胞術檢測分析倍體類型以及進行p14ARF、hMLHl、pi6Ira'、MGMT、k-ras、APC、p53、BAX和TGFβRII共9個基因的免疫組化檢測。分析p14^~、hMLHl、p16INK4a、MGMT和MINTl基因啟動子甲基化以及CpG島甲基子表型(CIMP)和SCRC臨床病理特征、MSI、染色體不穩(wěn)定(CIN)以及相關基因表達的關系。

3、 結果：第一部分：1、p14^~、hMLHl、p16I~4,、MGMT和MINTl基因啟動子甲基化的陽性率分別為28．2％(20／71)、9．9％(7／71)、25·4％(18／71)、36·6％(26／71)和49．3％(35／71)，CIMP陽性率為21．1％(15／71)；2、hMLHl基因啟動子甲基化(+)的SCRC具有右半結腸癌多發(fā)(p=--O．018)和低分化癌多見(p=--O．032)的特征。pi6I~4'基因啟動子

4、甲基化(+)的SCRC具有結腸癌多發(fā)(P=--O．043)、低分化癌多見(p=--0．000)、淋巴結轉移多見(p=--O·034)、分期較晚(p=--O．046)的特征。p14^~、MGMT和MINTl三個基因的啟動子甲基化均和各項臨床病理學指標無顯著性關系；3、CIMP(+)SCRC中右半結腸癌(40％vsl2．5％。P=-O．024)、低分化癌(46．7％vsl4．3％，P=-O．012)、淋巴結轉移(86·7％vs48．2％，P

5、=-O．008)、TNMIII／Ⅳ期(86．7％vsSO．O％，P=-O．O¨)所占比例均顯著高于CIMP(一)者。第二部分：1、71例患者共檢出二倍體18例，異倍體50例(3例因Cv值大于8％從分析中剔除)；2、MSI的陽性率為9·9％(7／71)，所有陽性者均為BAT25和BAT26同時陽性；3、除了MGMT外，p14ARF(p=--O·062)、hMLHl(p=--O．074)、p16INK4a(P=O．053)和MINTl(p=

6、--O．002)基因啟動子甲基化均表現(xiàn)為二倍體多發(fā)的傾向。但是僅MINTl基因啟動子甲基化和二倍體的關系達到統(tǒng)計學顯著性意義。CIMP(+)者也表現(xiàn)為二倍體多發(fā)的顯著性特點(P=O·003)；4、hMLHl(p=--O．001)和MINTl(P=O．055)基因啟動子甲基化(+)者具有MSI多見的傾向。p14^~、p16'sK4~、MGMT基因啟動子甲基化和MSI無顯著性關系。CIMP(+)者中MSI的陽性率大于CIMP(一)者(20．

7、0％vs7．1％)，但尸值為O·158，未達到統(tǒng)計學顯著性意義：5、微衛(wèi)星和染色體穩(wěn)定型(微衛(wèi)星穩(wěn)定且為二倍體，MACS型)SCRC的hMLHl基因啟動子甲基化的陽性率顯著低于MSI型(MSI，無論二倍體或異倍體)(7．7％vs57．1％，p=--0．031)，MINTl基因啟動子甲基化的陽性率顯著高于CIN型(微衛(wèi)星穩(wěn)定且為異倍體)(69．2％vs35·4％，P=O．029)，p16'~4,基因啟動子甲基化陽性率似高于CIN型(46．

8、2％vsl6·7％，P=0．057)。MACS型的CIMP陽性率顯著高于CIN型(46．2％vs8．3％，p=--0·004)，而MACS型和MSI型在CIMP陽性率方面無顯著性差異。第三部分：1、p14ARF、hMLHl、D16I~4'、M6MT、k-ras、APC、p53、BAX和TGFBRII蛋白陽性表達率分別為68·6％(48／70)、76．8％(53／69)、6L8％(42／68)、87．3％(62／71)、43．7％(31／

9、71)、42．3％(30／71)、47．9％(34／71)、7L4％(50／70)和59．2％(42／71)；2、hMLHl(P=--O．046)、MGMT(P=O．010)基因的啟動子甲基化和相應基因的失表達密切相關，而p14^~和p16'~4,基因啟動子甲基化和相應基因的失表達無顯著性關系；3、MINTl基因啟動子甲基化和突變型p53蛋白表達密切相關(P=--O·024)，MINTl基因啟動子甲基化(+)者突變型p53蛋白陽性表達率

10、低于MINTl基因啟動子甲基化(一)者；4、MGMT基因啟動子甲基化(+)者具有k-ras蛋白高表達的趨勢(P=--O．070)。CIMP和APC、p53、BAX、TGFBRII蛋白表達均沒有顯著性關系，但和k-ras蛋白表達顯著相關(P=O．043)，CIMP(+)者k-ras蛋白陽性表達率顯著高于CIMP(一)者。 結論：第一部分：hMLHl、p16INK4a基因啟動子甲基化和CIMP具有顯著的臨床病理學意義。hMLHl基因

11、啟動子甲基化(+)的SCRC具有右半結腸癌多發(fā)和低分化癌多見的顯著性特征。p16INK4a基因啟動子甲基化(+)的SCRC具有結腸癌多發(fā)、低分化癌多見、淋巴結轉移多見和分期較晚的顯著性特征。CIMP(+)的SCRC具有右半結腸癌多發(fā)、低分化癌多見、常有淋巴結轉移和分期較晚的顯著性特點。第二部分：1、MINTl、hMLHl基因啟動子甲基化以及CIMP和基因組遺傳學不穩(wěn)定性(CIN和MSI)具有密切的關系。MINTl基因啟動子甲基化(+)者

12、及CIMP(+)者均表現(xiàn)為二倍體多發(fā)的顯著性特點，而hMLHl基因啟動子甲基化(+)者則具有MSI多見的顯著性特點；2、MACS型的SCRC是SCRC的一個獨立亞型，具有和CIN型及MSI型不同的獨特的臨床病理和基因表達特征。MACS型SCRC的hMLHl基因啟動子甲基化的陽性率顯著低于MSI型，MINTl基因啟動子甲基化的陽性率顯著高于CIN型，CIMP陽性率顯著高于CIN型。提示多基因同時甲基化可能為MACS型SCRC的重要發(fā)病機制

13、。hMLHl基因啟動子甲基化可能為MSI型SCRC的特異性發(fā)病機制，而在MACS型SCRC的發(fā)生發(fā)展過程中可能并不扮演重要角色；3、CIN、MSI和多基因啟動子甲基化(CIMP)三者之間反映了表遺傳學機制和遺傳學機制既相互競爭又相互依存的復雜關系。CIN機制是相對獨立于MSI機制及表遺傳學機制(多基因啟動子甲基化)之外的。MSI機制和表遺傳學機制可能是一種相互依存的關系，但不是完全重疊的關系，相當一部分的MSI發(fā)生在表遺傳學機制的基礎上

14、，但也有部分的MSI并沒有顯著的表遺傳學背景。第三部分：1、hMLHl、MGMT基因啟動子甲基化和相應基因的失表達密切相關；2、MINTl基因啟動子甲基化(+)者呈現(xiàn)突變型p53蛋白低表達的顯著性特點；3、MGMT基因啟動子甲基化(+)者具有k—ras蛋白高表達的傾向(P=-O．070)。而這種關系可能是通過MGMT蛋白的失活導致k-ras基因突變引起的；3、CIMP和k-fas蛋白的激活表達密切相關。這種關系可能是通過MGMT基因啟動