血栓性血小板減少性紫癜發(fā)病機理及腫瘤細(xì)胞中ADAMTS13表達的研究.pdf

1、本文論述了血栓性血小板減少性紫癜發(fā)病機理及腫瘤細(xì)胞中ADAMTS13表達的研究。 一、血栓性血小板減少性紫癜發(fā)病機理的研究。 1，利用國際上首批建立的ADAMTSl3抗原檢測方法檢測TTP和其它相關(guān)疾病患者的ADAMTSl3抗原含量，發(fā)現(xiàn)： 1)正常漢族人ADAMTSl3含量為601±145mU／ml(n=26)，與白種人ADAMTSl3含量950-a=210mU／mi(n=20)相比有顯著差異(p

2、正常人血清中ADAMTSl3含量明顯低于血漿，為413±232mU／ml(p

3、E治療前ADAMTSl3含量嚴(yán)重減低，低于原發(fā)性TTP，PE治療后可相應(yīng)的恢復(fù)，lO名正常攜帶者的ADAMTSl3含量331±110mU／ml(p

4、分別為829±229mU／mi、721±192mU／mi，p<0．01。 2，凝血酶敏感蛋白1(TSPl)是體內(nèi)除ADAMTSl3以外的具有降解VWF并影響其功能的酶。通過檢測多種疾病中TSPl的含量，發(fā)現(xiàn)： 1)正常對照組血漿TSPl為18±7mg／L；ITP患者血漿TSPl為16±8mg/L；SLE患者血漿TSPl為13±9mg/L；腫瘤患者TSPl含量為24±4mg／L；骨髓移植患者為21±4mg/L；AMI患者為

5、21±2mg/L；而血漿置換前的TTP患者TSPl平均含量為6mg／L，與正常人或其它患病組相比都有顯著差異。 2)發(fā)性TTP患者TSPl治療前平均為6mg/L，治療后升至13mg/L，與ADAMTSl3活性的變化平行；與ADAMTSl3含量的變化一致；二指標(biāo)的變化均受治療的影響。其中TSPl和ADAMTSl3抗原含量相關(guān)系數(shù)R2=0．79。 3，通常情況下，抗血管性血友病因子(VWF)自身抗體的出現(xiàn)會導(dǎo)致獲得性血管性血

6、友病，但是TTP患者中也發(fā)現(xiàn)了抗血管性血友病抗體，并且VWF抗原不降低，通過一系列的檢測，發(fā)現(xiàn)： 1)2名抗VWF抗體陽性的TTP患者六份血漿中ADAMTSl3活性(殘余膠原結(jié)合實驗檢測)均>50％，另1名抗VWF抗體陽性的患者ADAMTSl3<5％，該名患者同時還有抗ADAMTSl3抗體；使用VWFA2區(qū)底物法檢測三名患者的ADAMTSl3活性與膠原結(jié)合實驗一致；三名患者都檢測到超大分子量VWF多聚物，顯示體內(nèi)無法降解VWF：

7、提示抗VWF抗體在體內(nèi)可能影響ADAMTSl3活性。 2)經(jīng)過ELISA法檢測抗VWF抗體和VWFAl、A2、A3區(qū)結(jié)合的情況發(fā)現(xiàn)，ADAMTSl3活性正常的2名患者抗VWF抗體表位不明；而第三名患者抗VWF抗體作用于VWF的A1區(qū)。 二、遺傳性血栓性血小板減少性紫癜發(fā)病基礎(chǔ)和臨床特征的研究。 1，通過臨床觀察和ADAMTSl3活性、抑制物及抗原檢測診斷了國內(nèi)首例遺傳性TTP，臨床觀察發(fā)現(xiàn)： 1)成人遺傳

8、性TTP發(fā)病分期和特點如下：急性期，臨床癥狀明顯，血小板不易恢復(fù)到正常：慢性復(fù)發(fā)期，臨床癥狀緩解或消失，血小板周期性減低(3～4周／周期)；慢性復(fù)發(fā)2期：臨床表現(xiàn)逍遙，血小板減低間隔延長(6周～數(shù)月，不固定)；痊愈期：無臨床癥狀，血小板不再降低。 2)ADAMTSl3抗原治療前為痕量；活性最低為0；抑制物檢測不到；TSPl也明顯減低；抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體低于原發(fā)性TTP； 3)治療前和發(fā)病間期，VWF多聚物電泳可見明顯的超大分

9、子量VWF。 2，通過對于遺傳性TTP患者ADAMTSl3基因的全長測序，我們發(fā)現(xiàn)兩個新的突變，并研究了它們對ADAMTSl3功能的影響： 1)患者有三個純合子突變分別是：G760G、R903L和R1095W，其中前2個突變?yōu)閱魏烁仕岫鄳B(tài)性(SNP)；第一個突變?yōu)橥x突變，其余為錯義突變；家系調(diào)查發(fā)現(xiàn)，患者25個親屬中11人為雜合子，14人不含上述突變；S903L在人群中的等位基因頻率低于日本人； 2)ADAMT

10、Sl3抗原檢測發(fā)現(xiàn)雜合子ADAMTSl3含量為正常人的一半。 3)體外實驗發(fā)現(xiàn)，S903L雖是SNP，但影響ADAMTSl3在細(xì)胞中的合成；而R1095W不但影響ADAMTSl3的合成，還影響其分泌。 3，血管性血友病因子裂解蛋白酶在腫瘤細(xì)胞中的表達和變化規(guī)律的研究。 1)與ADAMTS家族其它成員相似，ADAMTSl3在一些腫瘤細(xì)胞中高表達，比如在M07e，MEG01，HEL，MR2等細(xì)胞中，而在NB4，K56