多重耐藥菌消毒劑抗性和精氨酸代謝移動元件研究.pdf

1、研究目的： 1．明確我國臨床分離的鮑曼不動桿菌對消毒劑的敏感性，尤其是亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌對消毒劑的敏感性。 2．篩選消毒劑敏感性下降菌株，揭示鮑曼不動桿菌消毒劑抗性機制。 材料和方法： 第1章：收集我國16個城市25家醫(yī)院700株臨床分離的鮑曼不動桿菌(2004年12月-2005年12月)，采用瓊脂稀釋法測定苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生三種消毒劑最低抑菌濃度(MIC)，初步評估我國臨床分離的鮑

2、曼不動桿菌對這三種消毒劑的敏感性，并比較三種消毒劑對亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌(IRAB)和亞胺培南敏感鮑曼不動桿菌(ISAB)的MIC是否存在差異。 第2章：進一步根據(jù)克隆分層隨機挑選21株不同克隆的IRAB，采用懸液定量殺菌試驗測定三種消毒劑對不同克隆IRAB的殺滅效果，綜合MIC和殺菌試驗結(jié)果比較三種消毒劑對不同克隆IRAB的殺滅作用。 第3章：在第一部分研究基礎(chǔ)上篩選出20株三氯生敏感性下降菌株(MIC＞MIC90

3、)，采用瓊脂稀釋法測定阿米卡星、左氧氟沙星、四環(huán)素、亞胺培南四種抗菌藥物MIC，比較三氯生敏感菌株和敏感性下降菌株抗菌譜有無差異；分別添加兩種外排泵抑制劑(CCCP和PAβN)，測定其對三氯生和四種抗菌藥物的MIC有無影響；采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)進行同源性分析；采用PCR和雙脫氧核苷酸測序檢測fabI基因突變；采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測fabI基因、外排泵adeB、abeM和adeJ基因表達水平。 研究結(jié)果：

4、第1章：(1)苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生對臨床分離的700株鮑曼不動桿菌的MIC遠遠低于消毒規(guī)范中規(guī)定的消毒劑臨床使用濃度。(2)IRAB葡萄糖醛酸氯已定和三氯生MIC幾何平均值高于ISAB，但苯扎氯銨MIC幾何平均值無差異，反映出IRAB存在對葡萄糖醛酸氯已定和三氯生耐受的潛在可能，其臨床意義有待第2章進一步采用懸液定量殺菌試驗來評估． 第2章：(1)苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生(臨床使用濃度)能夠有效殺滅不同克

5、隆的IRAB，未發(fā)現(xiàn)臨床耐藥的情況；濃度是影響消毒劑殺滅效果的重要因素。(2)MIC結(jié)果表明，F(xiàn)克隆菌株對苯扎氯銨和葡萄糖醛酸氯已定敏感性有所下降，C克隆菌株對三氯生敏感性有所下降；懸液定量殺菌試驗結(jié)果表明，苯扎氯銨、葡萄糖醛酸氯已定和三氯生對6個不同克隆IRAB及散發(fā)IRAB的殺滅效果均無顯著差異。 第3章：fabI基因Gly93Ser突變引起鮑曼不動桿菌對三氯生高水平耐受(MIC≥4mg/L)，fabI高表達導(dǎo)致三氯生低水平

6、耐受(MIC=1-2mg/L)，外排泵與三氯生耐受的關(guān)系仍待進一步研究。 結(jié)論： 1．目前我國臨床分離的鮑曼不動桿菌對消毒劑敏感性較好，嚴格按照消毒規(guī)范操作能夠有效殺滅我國臨床分離的鮑曼不動桿菌。因此，合理規(guī)范的消毒隔離工作是有效控制鮑曼不動桿菌流行的必要條件之一． 2．由于IRAB(尤其是某些克隆)存在對消毒劑耐受的潛在可能，有必要對IRAB消毒劑敏感性進行監(jiān)測。 3．鮑曼不動桿菌能夠通過基因突變和高表