耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株對(duì)胍類(lèi)消毒劑抗性的研究.pdf

1、[背景]：
　　鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacter Baumanii,AB）屬于不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter），是需氧、不發(fā)酵糖類(lèi)的革蘭氏陰性桿菌，廣泛分布于自然界、醫(yī)院環(huán)境、人體皮膚和黏膜表面，是一種條件致病菌，對(duì)機(jī)體免疫力低下的危重患者，如重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)和燒傷科的病人威脅較大，可以引起各種組織和器官感染，包括肺炎、腦膜炎、菌血癥、尿路感染、外科傷口感染和軟組織感染等[1]。近年隨著臨床廣譜抗生素的廣泛使用

2、及介入性操作的普及，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)臨床常用抗生素的耐藥性也呈逐年上升趨勢(shì)，多重耐藥菌比例明顯增加[2]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥并不局限于抗生素，許多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)醫(yī)院常用消毒劑的抗力要高于標(biāo)準(zhǔn)菌株，這給醫(yī)院消毒劑的選擇與使用方法提出了新的要求，也對(duì)院內(nèi)感染控制工作帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。
　　[目的]：
　　為了解鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株耐藥性和消毒劑抗性特征，本研究收集了山東省國(guó)家級(jí)醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)點(diǎn)醫(yī)院的46株鮑曼不

3、動(dòng)桿菌臨床分離菌株，選擇臨床常用的26種抗生素進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)、用胍類(lèi)消毒劑進(jìn)行了抗性檢測(cè)(MIC、MBC試驗(yàn))，采用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)部分菌株進(jìn)行了消毒劑抗性基因篩查。其主要目的為:
　　(1)了解山東省醫(yī)院鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株臨床分布和耐抗生素現(xiàn)狀;
　　(2)分析比較臨床分離的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)胍類(lèi)消毒劑（聚六亞甲基單胍和聚六亞甲基雙胍）的抗抑菌效果;
　　(3)從分子水平上探討消毒劑抗性基因、鮑曼不動(dòng)桿菌

4、耐藥和消毒劑抗性表型之間的關(guān)系。
　　(4)為臨床合理使用消毒劑，提高消毒效果，預(yù)防控制鮑曼不動(dòng)桿菌引起的感染及相關(guān)疾病提供科學(xué)依據(jù)。
　　[方法]：
　　本研究收集了山東省濟(jì)南市和臨沂市的46株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株，使用藥敏紙片和最小抑茵濃度試驗(yàn)(MIC)對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株耐藥性進(jìn)行監(jiān)測(cè);用酸性曙紅比色法測(cè)定聚六亞甲基胍含量;使用消毒劑最小抑菌濃度(MIC)、最小殺菌濃度(MBC)測(cè)定鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離

5、菌株對(duì)胍類(lèi)消毒劑的抗性，并與標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌(8099)和鮑曼不動(dòng)桿菌(ATCC10501)進(jìn)行比較;采用PCR擴(kuò)增技術(shù)篩查鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株消毒劑抗性基因攜帶情況。
　　[結(jié)果]：
　　(1)46株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株中，多重耐藥菌者占93.48％(42/46)，不同地區(qū)、不同醫(yī)院收集的菌株對(duì)抗生素耐藥率存在差異。
　　(2)44株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基單胍的MIC結(jié)果平均值和中位數(shù)分別是13

6、.95(1.56～200)mg/L和6.25mg/L;對(duì)聚六亞甲基雙胍的MIC結(jié)果的平均值和中位數(shù)分別是18.82(3.12～200)mg/L和12.5mg/L。
　　44株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株與鮑曼不動(dòng)桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC10501、大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株8099對(duì)聚六亞甲基單胍MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基單胍的抗力與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501(t=0.636，p=0.528)和大腸桿菌8099（t

7、=0.636，p=0.528）的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　44株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501、大腸桿菌8099聚六亞甲基雙胍MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基雙胍的抗力大于大腸桿菌8099（t=4.075，p＜0.001），與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501（t=-0.901，p=0.372）的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　44株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基單胍與聚六亞甲基雙胍

8、MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基雙胍的抗性要強(qiáng)于聚六亞甲基單胍（t=-2.339，p=0.022）。
　　(3)36株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基單胍的MBC結(jié)果平均值及范圍、中位數(shù)分別是207.8(6.25～1600)mg/L和100mg/L;聚六亞甲基雙胍的MBC的平均值及范圍、中位數(shù)分別是380.9(12.5～1600)mg/L和400mg/L。
　　36株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株與鮑曼

9、不動(dòng)桿菌ATCC10501、大腸桿菌8099對(duì)聚六亞甲基單胍MBC實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基單胍的抗力大于大腸桿菌8099（t=7.026，p＜0.001），與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501（t=0.281，p=0.780）的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　36株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501、大腸桿菌8099聚六亞甲基雙胍MBC實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基雙胍的抗力

10、小于鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501（t=-2.562，p=0.015），但大于大腸桿菌8099（t=5.460，p＜0.001）。
　　36株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基單胍與聚六亞甲基雙胍MBC的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基雙胍的抗性要強(qiáng)于聚六亞甲基單胍(t=-3.299，p=0.002)。
　　上述結(jié)果顯示，聚六亞甲基單胍對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌抑菌和殺菌能力大于聚六亞甲基雙胍。
　　(4)選擇

11、23株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株進(jìn)行消毒劑抗性基因攜帶情況分析，在其染色體和質(zhì)粒上均未能檢出qacA/B基因，qacA/B攜帶率為0％，結(jié)果顯示未發(fā)現(xiàn)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株攜帶qacA/B基因;標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌8099、臨床分離的銅綠假單胞菌、大腸桿菌染色體及質(zhì)粒上也均未檢出qacA/B基因。23株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株中有21株在其染色體和質(zhì)粒上均檢出qacE△1-sul1基因，1株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株在其質(zhì)粒上檢出qacE△1

12、-sul1基因，1株菌染色體和質(zhì)粒上都未檢出qacE△1-sul1基因，其質(zhì)粒和染色體qacE△1-sul1基因攜帶率分別為95.65％(22/23)和91.30％(21/23)。在臨床分離的1株銅綠假單胞菌和1株大腸桿菌染色體和質(zhì)粒上均檢出qacE△1-sul1基因。
　　[結(jié)論]：
　　(1)山東省濟(jì)南市與臨沂市鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株呈多重耐藥現(xiàn)象，不同地區(qū)、不同醫(yī)院鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)抗菌藥物的耐藥性存在差異。

13、
　　(2)聚六亞甲基單胍對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株的抑菌能力與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501和大腸桿菌8099相比無(wú)差異;聚六亞甲基單胍對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株的殺菌能力與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501無(wú)差異，但強(qiáng)于大腸桿菌8099。
　　聚六亞甲基雙胍對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株的抑菌能力與鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC10501相比無(wú)差異，強(qiáng)于大腸桿菌8099;聚六亞甲基雙胍對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株的殺菌能力比鮑曼不動(dòng)桿菌AT

14、CC10501較弱，強(qiáng)于大腸桿菌8099。
　　鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株對(duì)聚六亞甲基雙胍的抗性均要強(qiáng)于聚六亞甲基單胍，說(shuō)明聚六亞甲基單胍對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株抑菌和殺菌能力要強(qiáng)于聚六亞甲基雙胍。
　　(3)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株質(zhì)粒和染色體qacA/B基因攜帶率均為0％，說(shuō)明臨床鮑曼不動(dòng)桿菌菌株qacA/B基因攜帶率現(xiàn)象極低。而鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株質(zhì)粒和染色體qacE△1-sul1基因攜帶率分別為95.65％和91

15、.30％，說(shuō)明鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離菌株qacE△1-sul1基因攜帶是普遍現(xiàn)象。質(zhì)粒上qacE△1-sul1基因高攜帶率高提示鮑曼不動(dòng)桿菌可能易于在菌株之間進(jìn)行基因抗性傳播。鮑曼不動(dòng)桿菌qacE△1-sul1基因陽(yáng)性菌株與陰性菌株MIC、MBC結(jié)果對(duì)比，qacE△1-sul1基因與其抗性表型可能無(wú)必然聯(lián)系。這一結(jié)論有待進(jìn)一步深入研究。
　　(4)鮑曼不動(dòng)桿菌是引起院內(nèi)感染的重要條件致病菌，其多重耐藥菌性呈逐年上升趨勢(shì)。在醫(yī)院對(duì)鮑曼