臨床分離泛耐藥鮑曼不動桿菌的體內(nèi)外聯(lián)合用藥研究.pdf

1、目的：
　　通過對安徽地區(qū)臨床分離鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumanni）進(jìn)行耐藥性分析，了解本地區(qū)的菌株分布與耐藥現(xiàn)狀。采用聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction, PCR）擴(kuò)增耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌（ Carbapenem-resistant Acinetobacter baumanni，CRAB）的碳青霉烯酶基因，探究該基因在耐藥菌株中的流行特征，為控制耐藥菌株的傳播提供理論基

2、礎(chǔ)，也為臨床醫(yī)務(wù)工作者合理應(yīng)用抗菌藥物提供一定的參考。
　　運用棋盤法聯(lián)合藥敏實驗（Checkerboard assay）、時間-殺菌實驗（Time-kill assay）以及防耐藥突變濃度（Mutant prevention concentrations，MPC）測定等方法，探究多粘菌素E（Colistin, COL）分別與磷霉素（FOS）、舒巴坦（SUP）、亞胺培南（IMP）、利福平（RIF）和左氧氟沙星（LVX）聯(lián)合對泛耐藥

3、鮑曼不動桿菌（Extensively drug resistant Acinetobacter baumannii，XDRAB）的體外協(xié)同效應(yīng)；建立鮑曼不動桿菌大蠟螟感染模型（Galleria mellonella infection model），深入探究多粘菌素聯(lián)合左氧氟沙星的體內(nèi)作用效果，為尋找新的抗生素治療策略提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　菌株來源
　　本實驗所用的120株鮑曼不動桿菌，全部分離于201

4、2-2013年住院患者的各類臨床標(biāo)本，收集范圍為安徽省21家三級甲等醫(yī)院。其中95株來源于痰標(biāo)本，12株來源于尿液標(biāo)本，9株來源于分泌物標(biāo)本，4株來源于血液標(biāo)本。藥敏實驗的質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922。質(zhì)控菌由安徽省細(xì)菌耐藥監(jiān)控中心保存。
　　方法：
　　1.采用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standard, CLSI）推薦的MH瓊脂倍比稀釋法測定臨床分離的鮑曼不動桿菌對

5、抗菌藥物的敏感性。
　　2.根據(jù)體外藥敏結(jié)果篩選 CRAB， PCR檢測包括 blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like, blaVIM, blaIMP, blaNDM, blaKPC等基因在內(nèi)的常見碳青霉烯酶基因的攜帶情況。
　　3.根據(jù)細(xì)菌的基因型和表型檢測結(jié)果，從120株鮑曼不動桿菌中篩選出XDRAB。運用棋盤法聯(lián)合藥敏實驗測定 COL聯(lián)

6、合 RIF，LVX，IMP，SUP和FOS對XDRAB的最低抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC）。
　　4.以鮑曼不動桿菌ATCC19606為親本株，體外用含COL的瓊脂平板篩選出COL耐藥突變株AB19606R，直至COL的MIC>128mg/L。
　　5. COL與LVX的體外聯(lián)合實驗對象為4株鮑曼不動桿菌，其中2株為臨床株，選自于XDRAB(分別為COL耐藥株、COL敏感

7、株)；另2株為鮑曼不動桿菌ATCC19606與COL耐藥突變株AB19606R。實驗方法包括：棋盤法聯(lián)合藥敏實驗，時間-殺菌實驗，MPC實驗，生物膜抑制實驗；體內(nèi)實驗運用大蠟螟感染模型，綜合評估LVX單藥及聯(lián)用COL時對4株鮑曼不動桿菌的作用效果。
　　結(jié)果：
　　1.研究表明，120株臨床分離的鮑曼不動桿菌對13種抗菌藥物的均表現(xiàn)出不同程度的耐藥性。其中氨曲南（AZM）和頭孢曲松（CRO）的敏感性最低，為14.3％和14.

8、7%；IMP，MEN，哌拉西林/他唑巴坦（TZP）,阿米卡星（AMK）和環(huán)丙沙星（CIP）的敏感率分別為38.9%,31.5%,37.1%,40.4%,33.6%。120株鮑曼不動桿菌中CRAB為70株。
　　2.經(jīng)檢測，70株 CRAB中 blaOXA-23和 blaOXA-51基因全部陽性，并未檢測出blaOXA-24，blaOXA-58，blaVIM，blaIMP, blaNDM和 blaKPC基因。
　　3.本研究篩

9、選出50株XDRAB進(jìn)行聯(lián)合藥敏實驗。當(dāng)選定的五種抗生素分別與COL聯(lián)用時，對部分菌株的抗菌活性明顯增強(qiáng)，且通過計算得出的部分抑菌濃度指數(shù)（Fractional inhibitory concentration index, FICI）大多低于0.5。COL與五種藥物聯(lián)合展現(xiàn)出不同程度的協(xié)同效應(yīng)，其中 COL聯(lián)合 RIF的協(xié)同率為92%，聯(lián)合IMP為88%，聯(lián)合SUP為72%，聯(lián)合LVX為64%，聯(lián)合FOS為50%。
　　4. L

10、VX聯(lián)用COL對于COL敏感的臨床株有明顯的協(xié)同殺菌效應(yīng)；MPC試驗中，兩株COL敏感株(ATCC196906和臨床敏感株)的COL MPC為>128mg/L和>256mg/L，而聯(lián)用2mg/L的LVX之后，COL的MPC值均下降到16mg/L；抑制突變選擇指數(shù)（Mutation prevention index, MPI）分別比COL單藥時下降了8倍以上和16倍以上。體內(nèi)實驗中，LVX與COL聯(lián)用時，幼蟲的生存率明顯高于單獨用藥的存活

11、率。
　　結(jié)論：
　　1.鮑曼不動桿菌已成為安徽地區(qū)院內(nèi)感染的重要病原菌，近年來不斷增長的感染率以及多重耐藥甚至廣泛耐藥和全耐藥菌株的出現(xiàn)，在很大程度上限制了臨床治療。
　　2.本實驗中收集的耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌中，較流行的的碳青霉烯酶基因型為blaOXA-23和blaOXA-51。
　　3.多粘菌素是泛耐藥鮑曼不動桿菌感染的最后治療選擇。到目前為止，大多數(shù)泛耐藥菌仍對多粘菌素保持著較高的敏感性，但國內(nèi)外已有