通過抗體轉(zhuǎn)型改變尋常型天皰瘡抗體致病性的實驗研究.pdf

1、天皰瘡(pemphigus)是一嚴重的大皰性皮膚粘膜性疾病，其中尋常型天皰瘡(pemphigus vulgaris，PV)具有最常見、病情重和死亡率最高的特點。PV亦是一個器官特異性自身免疫病的典型，患者體內(nèi)存在針對PV抗原(pemphigus vulgaffs antigen，PVA)——大部分為橋粒芯糖蛋白(desmoglein，Dsg)3，也有部分為Dsgl的IgG型自身抗體，該抗體與角質(zhì)形成細胞 (keratinocyte，KC

2、)表面的抗原分子結(jié)合，導(dǎo)致細胞間的粘附能力喪失，出現(xiàn)PV特有的臨床表現(xiàn)和組織病理學(xué)改變。疾病的活動和抗體的滴度及其亞型有關(guān)，其中IgGl和IgG4為PV患者體內(nèi)最重要的兩種亞型?；顒悠诨颊咭訧gG4亞型為主，將此類患者的血清被動轉(zhuǎn)移至新生鼠可導(dǎo)致新生鼠出現(xiàn)天皰瘡樣的皮損；而消退期或靜止期的患者以IgGl亞型為主，將此種類型的血清被動轉(zhuǎn)移至新生鼠不產(chǎn)生天皰瘡樣改變。因此，IgG4型的抗體是Pv的“致病性抗體”，而IgGl可能僅僅是PV的“

3、血清學(xué)標(biāo)記”。 為了通過一些干預(yù)手段對抗體的亞型進行轉(zhuǎn)換，從而達到疾病的治療目的，本研究首先利用ELISA方法對瑞金醫(yī)院門診及住院的52例PV患者的抗Dsg3、抗Dsgl的IgG抗體進行檢測，發(fā)現(xiàn)兩種抗體的滴度均有升高，且Dsg3的滴度和粘膜損害相關(guān)。然后對患者血清中的IgG抗體亞型進行了檢測，并與正常對照比較，發(fā)現(xiàn)IgG4亞型抗體的滴度在患者中明顯高于正常對照，統(tǒng)計學(xué)上存在顯著性差異；而IgGl亞型抗體的滴度在患者和正常對照

4、間無明顯差異。為證明IgG4亞型抗體致病性抗體提供了臨床依據(jù)。最后在構(gòu)建重組．Dsg3 ECl-2表位融合蛋白的基礎(chǔ)上，利用免疫佐劑的干預(yù)對抗體亞型進行轉(zhuǎn)換。分別采用主要誘導(dǎo)Thl型細胞免疫應(yīng)答的完全弗氏佐劑(complete Freund<',>s adiuvant，CFA)和Th2型細胞免疫應(yīng)答為主的氫氧化鋁[A1(OH)3]佐劑，乳化ECl-2蛋白抗原后分別免疫C57BL／6小鼠，對免疫后細胞因子的表達、抗體的產(chǎn)生及其滴度、亞型進

5、行研究(人的IgGl在鼠相當(dāng)于IgG2a，人的IgG4在鼠為IgGl)，并通過體外表皮培養(yǎng)和體內(nèi)聯(lián)合表皮松解毒素A(exfoliative toxin A，ETA)后被動轉(zhuǎn)移抗血清至BALB／c新生鼠來觀察抗體的致病性。研究結(jié)果顯示，免疫后CFA．組小鼠產(chǎn)生較多的Thl型細胞因子IFNv；AlfOH)3組則以Th2型細胞因子IL-4為主。兩組小鼠均有特異性的抗ECl-2 IgG型抗體產(chǎn)生，但其亞型不同，CFA組以IgG2a為主，而A1(

6、OH)3組則僅表達IgGl；CFA組小鼠血清間接免疫熒光(indirect immunofluorenscence,IIF)示弱的熒光沉積，而AI(OH)3組IIF檢測則表現(xiàn)為明亮的熒光沉積。向體外培養(yǎng)的新生鼠表皮中加入CFA組小鼠抗血清，僅出現(xiàn)輕度的棘層松解，而加入Al(OH)3組抗血清后則出現(xiàn)明顯的鏡下表皮內(nèi)大皰。被動轉(zhuǎn)移試驗發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移了CFA組抗血清的新生鼠未出現(xiàn)表皮內(nèi)水皰，而轉(zhuǎn)移AI(OH)3組抗血清的新生鼠皮膚表面出現(xiàn)大皰，尼氏

7、征陽性。以上實驗顯示經(jīng)聯(lián)合A1(OH)3佐劑免疫小鼠后產(chǎn)生的抗血清以IgGl亞型(相當(dāng)于人的IgG4)為主，能和天然抗原結(jié)合，引起表皮松解，有顯著的致病性；而聯(lián)合CFA佐劑免疫后，小鼠的抗血清以IgG2a亞型(相當(dāng)于人的IgGl)為主，在體內(nèi)外實驗中均無明顯的致病性。總之，通過本項研究觀察到，在PV患者中，IgG4型抗體和疾病密切相關(guān)；在小鼠實驗中，明確了PV的致病性抗體亞型，通過不同免疫佐劑干預(yù)，其抗體亞型可發(fā)生轉(zhuǎn)換，為進一步探索PV