小鼠骨髓MSCs減輕MHC半相合HSCT后cGVHD的研究.pdf

1、目前造血干細(xì)胞移植(hematopoieticstemcellstransplantation，HSCT)越來越多地用于惡性血液病、惡性腫瘤性疾病和某些遺傳性疾病的治療，慢性移植物抗宿主病(chronicgraft-versus-hostdisease，cGVHD)是異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneicHSCT，allo-HSCT)后常見并發(fā)癥，是影響移植后存活率和患者生活質(zhì)量的重要障礙之一。本實(shí)驗(yàn)的研究目的就是建立Allo-HS

2、CT后的cGVHD的動(dòng)物模型，研究骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)對于allo-HSCT后cGVHD的影響。 為此，本實(shí)驗(yàn)建立了MHC半相合HSCT后cGVHD的小鼠模型，并在此基礎(chǔ)上觀察MSCs對cGVHD的影響，探索減輕或治愈cGVHD的新途徑。本實(shí)驗(yàn)分兩部分。 第一部分MHC半相合HSCT后cGVHD小鼠模型的建立1.方法(BALB/c×C57BL/6)F1H-2d/b(

3、CB6F1)雌性小鼠接受不同劑量γ射線照射，.輸注雄性BALB/c小鼠的骨髓細(xì)胞與不同數(shù)量脾細(xì)胞，觀察移植后小鼠體重、體形、毛發(fā)變化及生存情況；染色體核型分析觀察植入情況；臟器病理改變；ELISA方法檢測各組小鼠血清抗ss-DNA抗體、抗ds-DNA抗體。 2.結(jié)果①移植后100天小鼠染色體檢查均為供受者共存的嵌合體；②移植后小鼠均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(移植后100天)，照射8Gy、輸注骨髓細(xì)胞8×106個(gè)/只+脾臟細(xì)胞4.5×107

4、個(gè)/只組小鼠頭面部脫毛，與其它試驗(yàn)組小鼠相比體重減輕差異顯著(P＜0.05)；③該組小鼠血清1：8倍稀釋抗ss-DNA、抗ds-DNA抗體明顯高于其它試驗(yàn)組(P＜0.05)；④病理結(jié)果顯示該組小鼠皮膚真皮膠原纖維腫脹、勻化，膠原纖維束增厚，成纖維細(xì)胞胞核類圓形，有淋巴細(xì)胞浸潤；毛囊、皮脂腺及汗腺萎縮、減少；肝臟包膜增厚，肝索排列紊亂，肝細(xì)胞明顯水腫，匯管區(qū)可見淋巴細(xì)胞浸潤。 3.結(jié)論CB6F1雌性小鼠接受8Gyγ射線照射，輸注雄

5、性BALB/c骨髓細(xì)胞8×106個(gè)/只+脾臟細(xì)胞4.5×107個(gè)/只條件下移植后100天建立MHC半相合HSCT后cGVHD小鼠模型。 第二部分骨髓來源的MSCs對MHC半相合HSCT后cGVHD的影響1.方法雄性BALB/c小鼠骨髓MSCs分離、培養(yǎng)及傳代。CB6F1雌性小鼠接受8Gyγ射線照射，輸注雄性BALB/c骨髓細(xì)胞8×106個(gè)/只，脾臟細(xì)胞4.5×107/只，與不同數(shù)量(2×106個(gè)/只、4×106個(gè)/只、8×106

6、個(gè)/只)MSCs組合，觀察移植后小鼠體重、體形、毛發(fā)變化及生存情況；染色體核型分析觀察植入情況；臟器病理改變；ELISA方法檢測各組小鼠血清抗ss-DNA、抗ds-DNA抗體檢測；ELISA方法檢測各組小鼠血漿IL-4、IFN-γ濃度。 2.結(jié)果①移植后100天小鼠均為供受者共存的嵌合體；②cGVHD模型基礎(chǔ)上輸注高數(shù)量MSCs(8×106個(gè)/只)移植后100天體重減輕低于中、低數(shù)量MSCs實(shí)驗(yàn)組及標(biāo)準(zhǔn)cGVHD組小鼠，差異顯著

7、(P＜0.05)；③高劑量MSCs輸注組抗ss-DNA、抗ds-DNA抗體顯著降低(P＜0.05)；④病理結(jié)果顯示高數(shù)量MSCs組小鼠皮膚、肝臟及小腸病理改變明顯減輕；⑤高劑量MSCs輸注組血漿IL-4濃度較標(biāo)準(zhǔn)cGVHD組降低，差異顯著(P＜0.05)，IFN-γ濃度高于標(biāo)準(zhǔn)cGVHD組。 3.結(jié)論在cGVHD小鼠模型基礎(chǔ)上，輸注不同數(shù)量的MSCs可以減輕MHC半相合HSCT后cGVHD，且具有一定的量效關(guān)系，高數(shù)量MSCs輸