大腸癌p16，APC基因表遺傳機制的初步研究.pdf

1、腫瘤和表遺傳是目前醫(yī)學領域研究的熱點,DNA甲基化是表遺傳發(fā)生的主要機制.抑癌基因p16和APC廣泛參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展.該文旨在研究大腸癌中p16和APC基因的甲基化狀況及其表達情況,探討和大腸癌發(fā)生發(fā)展的關系,為大腸癌的臨床診斷和治療提供新的實驗依據(jù).收集新鮮的散發(fā)性大腸癌及其相應的癌旁組織45例,采用酚氯仿法提取基因組DNA,TriZol方法提取總RNA;應用甲基化特異性的PCR方法(methylation specific PC

2、R,MSP)檢測p16和APC基因在大腸癌中的甲基化狀態(tài);應用AB1377全自動測序儀對p16基因MSP產(chǎn)物進行測序,進一步分析p16基因甲基化狀態(tài);應用RT-PCR技術,以管家基因GAPDH為內(nèi)參照,檢測相應大腸癌中p16基因mRNA表達水平;統(tǒng)計學分析采用χ2test和Fisher's exact probability test.研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):p16基因在大腸癌中甲基化率為28.9％(13/45),其中有8例癌及癌旁組織都發(fā)生了甲

3、基化,測序結(jié)果表明MSP方法完全可靠.p16基因甲基化的發(fā)生和病人年齡,性別及分級等無關,而與腫瘤轉(zhuǎn)移有相關性.有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移的甲基化率50％(8/16)顯著高于無轉(zhuǎn)移病例20.8％(P<0.05);在檢測的20例大腸癌標本中,9例p16基因表達降低,其中3例表達缺失;10例表達升高;l例表達無差異.在所檢測的9例甲基化標本中,6例表達明顯降低,其中2例表達缺失;2例表達升高;l例表達無差異.發(fā)生甲基化病例的p16基因表達水平低

4、于未甲基化病例(Fisher's exact probability test P=0.055);在7例Duke's分期CD期病例中,5例p16基因表達下降,12例AB期病例中,4例下降;在45例大腸癌中未檢測到APC基因異常甲基化.由上述研究結(jié)果得到如下結(jié)論:p16基因在大腸癌中甲基化率為28.9％,p16基因高甲基化是大腸癌中常見的分子改變之一;p16基因高甲基化可能發(fā)生在大腸癌變早期并與大腸癌的惡性進展有相關性.p16基因高甲基化