銀杏組織、細(xì)胞培養(yǎng)及其生產(chǎn)黃酮的代謝調(diào)控研究.pdf

1、南京林業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文銀杏組織、細(xì)胞培養(yǎng)及其生產(chǎn)黃酮的代謝調(diào)控研究姓名：陳穎申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：森林培育學(xué)指導(dǎo)教師：曹福亮20050601代培養(yǎng)基為MSNAAl0mg／LKT05mg／L；葉片、子葉、根誘導(dǎo)的愈傷組織中黃酮含量高。稀土處理銀杏愈傷組織后在培養(yǎng)的早期，蛋白質(zhì)、核酸、多胺含量的增加、細(xì)胞活力提高，POD活性在第10天達(dá)到高峰早于PAL活性的出峰時(shí)間(在15d)，稀土處理促進(jìn)POD同工酶酶帶III、Ⅳ、V的含量，特別是第

2、10～15天對酶帶Ⅲ的保持，可能與初生代謝向次生代謝轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵期有關(guān)。O5、10mg／L稀土處理在20d黃酮含量分別為125％、11％，分別比對照高24％，9％。高濃度的稀土(1020rag／L)對黃酮的合成不利。6水楊酸處理對銀杏的愈傷組織生長、細(xì)胞活力、核酸含量、蛋白質(zhì)含量在培養(yǎng)的12d內(nèi)起促進(jìn)作用，以后出現(xiàn)抑制。POD、PAL、CAT活性、Put在第6天，9天出現(xiàn)高峰，比對照的出峰時(shí)間提早，縮短了細(xì)胞從初級(jí)代謝到次級(jí)代謝轉(zhuǎn)變的時(shí)間

3、，在12d時(shí)各指標(biāo)間存在極顯著的正相關(guān)，其中055mg／L的水楊酸處理總黃釀含量達(dá)到高峰，分別達(dá)187％，190％，比對照高19％、21％，而10mg／L水楊酸處理對促進(jìn)總黃酮的合成影響不大。7光照培養(yǎng)的懸浮細(xì)胞總黃酮含量較黑暗中的高，SA處理懸浮細(xì)胞在第10d總黃酮含量增加。稀土處理后可以增加總黃酮苷的含量，其中稀處理是對照的207倍；另外也改變著三種黃酮苷元(槲皮素、山柰索、異鼠李素)的比例。8對銀杏三種不同狀態(tài)的愈傷組織進(jìn)行蛋白質(zhì)

4、SDSPAGE電泳分析及電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，三種愈傷組織代表細(xì)胞生長的三個(gè)階段；綠色愈傷組織處于分生組織狀態(tài)，黃酮的含量并不是最高；微黃色的愈傷組織細(xì)胞處于初生代謝向次生代謝轉(zhuǎn)化的階段，蛋白質(zhì)含量開始減少，核膜不完整，淀粉含量較高，黃酮含量高于綠色的愈傷，是次生代謝的特征：褐色愈傷組織蛋白質(zhì)含量很低，條帶數(shù)減少，有5條蛋白質(zhì)消失，且黃酮的含量最低，細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象，內(nèi)含物解體，細(xì)胞核解體，是衰亡的主要特征。關(guān)鍵詞；銀杏；組織培養(yǎng)；細(xì)胞