CRH對(duì)妊娠子宮肌炎性因子生成的影響.pdf

1、早產(chǎn)是圍產(chǎn)期新生兒死亡的首要原因，其死亡率約占5-15％。雖然經(jīng)過研究者多年的努力，早產(chǎn)的發(fā)生率至今未得到有效的控制，究其根本原因是由于人類分娩啟動(dòng)的機(jī)理尚未明晰。
　　 在正常情況下，妊娠足月之前，子宮都是處于一種相對(duì)靜息的狀態(tài)，其興奮性低，不發(fā)生大的收縮。只有在臨近分娩時(shí)才發(fā)生高頻率、高強(qiáng)度的規(guī)律宮縮。因此，子宮由靜息態(tài)向收縮態(tài)的轉(zhuǎn)化無疑是啟動(dòng)分娩的關(guān)鍵之所在。但迄今對(duì)于子宮靜息狀態(tài)終止進(jìn)而轉(zhuǎn)為收縮激活的機(jī)制，尚未闡明。目前

2、的研究表明，來自母體和胎兒的諸多因子之間的相互作用而導(dǎo)致了子宮肌由靜息態(tài)向收縮態(tài)的轉(zhuǎn)化。
　　 妊娠期間人類胎盤合成和分泌大量的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone，CRH)在人類分娩啟動(dòng)中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，母體CRH水平與妊娠的長(zhǎng)短有明顯的相關(guān)性，早產(chǎn)孕婦血中CRH水平在妊娠早中期就高于正常孕婦，且早產(chǎn)者CRH水平與早產(chǎn)的時(shí)間呈正相關(guān)，提示了CRH很可能是調(diào)控分娩啟動(dòng)一

3、系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)的觸發(fā)因子。研究表明，CRH有著多方面的作用，如CRH可調(diào)控胎兒下丘腦-垂體-腎上腺軸的成熟；作用于胎盤調(diào)節(jié)雌激素、孕激素生成；影響胎膜前列腺素的合成和代謝；它也可直接作用于子宮肌，調(diào)節(jié)其對(duì)催產(chǎn)素的反應(yīng)性[2-4]。但它究竟觸發(fā)了哪些反應(yīng)最終導(dǎo)致分娩的啟動(dòng)仍然不清楚。
　　 近年來研究證明，子宮激活分娩是一個(gè)炎癥反應(yīng)過程，在妊娠末期子宮肌層以及宮頸就有大量白細(xì)胞浸潤，臨產(chǎn)子宮肌也表現(xiàn)出明顯的炎癥反應(yīng)狀態(tài)，大量的白細(xì)胞

4、浸潤、組織腫脹以及一些炎性因子和標(biāo)志物的表達(dá)等等?？傊置浜芸赡苁茄装Y反應(yīng)，但是子宮肌的炎癥又是如何始發(fā)的目前尚不清晰。CRH是否有可能通過調(diào)節(jié)子宮肌細(xì)胞炎性因子的表達(dá)，始發(fā)于炎癥，尚無相關(guān)研究報(bào)道。
　　 因此本課題利用RT-PCR方法、放射免疫方法、Western Blot方法以及si-RNA技術(shù)檢測(cè)妊娠子宮肌細(xì)胞炎性因子mRNA和蛋白生成的變化，研究CRH對(duì)妊娠子宮肌細(xì)胞炎性因子生成的影響。
　　 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如

5、下：
　　 1.CRH能劑量依賴性上調(diào)未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞炎性因子(IL-6、IL-8、MCP-1)mRNA和蛋白的生成。但對(duì)臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞中的IL-6、IL-8、MCP-1mRNA和蛋白的生成無明顯影響。
　　 2.利用siRNA技術(shù)分別干擾未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞中CRHR1和CRHR2的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，干擾CRHR1的表達(dá)后，CRH升高未臨產(chǎn)子宮肌炎性因子的作用消失；干擾CRHR2的表達(dá)后，CRH仍能升高未臨產(chǎn)子宮肌炎性因子的

6、作用，而且CRH的效應(yīng)能被CRHR1的特異性拮抗劑Antalarmin阻斷。
　　 3.我們應(yīng)用siRNA技術(shù)干擾未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞中CRHR2的表達(dá)，使其僅表達(dá)CRHR1，從而觀察CRH恿過CRHR1調(diào)節(jié)炎性因子的可能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在CRHR2干擾的未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞中，CRH能夠劑量依賴性的升高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平，此效應(yīng)能夠被Antalarmin阻斷，提示CRH通過與CRHR1作用升高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平。
　　

7、而且CRH升高未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞內(nèi)炎性因子水平的效應(yīng)能被AC抑制劑SQ22536阻斷，而AC激動(dòng)劑Forskolin則能模擬CRH升高未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞內(nèi)炎性因子水平的作用，由此提AC激活的確參與CRH促進(jìn)未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞炎性因子生成的調(diào)節(jié)。
　　 進(jìn)一步，我們將CRH和PKA抑制劑H89聯(lián)合處理細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)H89能逆轉(zhuǎn)CRH升高未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞內(nèi)炎性因子水平的效應(yīng)，提示PKA參與CRH調(diào)節(jié)未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞炎性因子生成的調(diào)節(jié)。這一

8、部分實(shí)驗(yàn)提示CRH升高未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞炎性因子的生成的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是AC-cAMP-PKA。
　　 4.我們聯(lián)合使用CRH和NF-kB的抑制劑(NFKBIZ)處理未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞后，CRH升高炎性因子水平的作用消失，提示CRH可能是通過激活核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB，進(jìn)而促進(jìn)炎性因子(IL-6、IL-8、MCP1)的轉(zhuǎn)錄翻譯。而我們將AC激動(dòng)劑Forskolin和NF-kB的抑制劑聯(lián)合使用處理細(xì)胞后，F(xiàn)orskolin模擬CRH

9、升高未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞內(nèi)炎性因子水平作用也消失，提示NF-kB參與了AC促進(jìn)未臨產(chǎn)子宮肌細(xì)胞內(nèi)炎性因子水平升高的過程。
　　 與上一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相結(jié)合，提示CRH確實(shí)是通過AC-cAMP-PKA信號(hào)通路進(jìn)而激活NF-kB，促進(jìn)炎性因子(IL-6、IL-8、MCP1)的生成。
　　 結(jié)論：
　　 本研究表明，CRH能促進(jìn)未臨產(chǎn)子宮平滑肌細(xì)胞中炎性因子的生成，且主要是通過CRHR1發(fā)揮作用的。對(duì)其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的研究