細(xì)胞穿透肽NLS-TAT介導(dǎo)TGFβ3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠前軟骨干細(xì)胞促其成軟骨方向分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　細(xì)胞穿透肽(CPP)是一種新型的非病毒基因載體，NLS-TAT便是CPPs其中的一種，本實(shí)驗(yàn)旨在利用NLS-TAT將帶有TGFβ3的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)入SD大鼠前軟骨干細(xì)胞，促進(jìn)其hTGFβ3過表達(dá)，從而觀察前軟骨干細(xì)胞成軟骨方向分化能力和探索細(xì)胞穿透肽轉(zhuǎn)染細(xì)胞規(guī)律。
　　方法：
　　獲得人類TGFβ3基因，將其重組入pEGFP-N1-TGFβ3穿梭質(zhì)粒。將獲得鑒定的此種重組質(zhì)粒通過細(xì)胞穿透肽NLS-TAT轉(zhuǎn)染

2、進(jìn)入經(jīng)過免疫磁珠分選的前軟骨干細(xì)胞(PSCs)，分別在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、120小時(shí)，通過qPCR、Western blotting和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)層面前軟骨干細(xì)胞中TGFβ3的表達(dá)，同時(shí)在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、120小時(shí)通過qPCR、Western blotting和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)type II collagen，Sox9，aggrecan等一系列成軟骨相關(guān)指標(biāo)的基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)變

3、化情況。
　　結(jié)果:
　　與對(duì)照組相比，經(jīng)NLS-TAT轉(zhuǎn)染重組pEGFP-N1-TGFβ3后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、120小時(shí)前軟骨干細(xì)胞中TGFβ3在基因水平和蛋白水平均明顯增高；與此同時(shí)，實(shí)驗(yàn)組中type II collagen，Sox9，aggrecan等成軟骨指標(biāo)在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、120小時(shí)均相對(duì)于樣本組有不同程度的升高。
　　結(jié)論：
　　以上結(jié)果證明NLS-TAT有協(xié)助重組質(zhì)粒pE