房縣小冬菇中香菇多糖的精制、結(jié)構(gòu)鑒定和體外抗腫瘤活性研究.pdf

1、香菇為藥食兩用真菌，含有多種藥用成分，特別是其中的香菇多糖具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和抗氧化等功能。香菇多糖作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，因其毒副作用小、療效好，具有重要的開發(fā)和研究的價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)以房縣小冬菇（香菇屬）為原料，采用堿提工藝提取粗多糖，再經(jīng)雙氧水脫色、超濾分級分離得到兩個(gè)均一分子量的多糖組分，分別命名為LNT1和LNT2，并對其結(jié)構(gòu)、糖鏈構(gòu)象及體外抗腫瘤活性等方面進(jìn)行了研究，為其進(jìn)一步的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。
　　 第一部分:

2、香菇多糖LNT1和LNT2的提取分離純化
　　 以房縣小冬菇為原料，采用堿提工藝提取粗多糖，通過正交實(shí)驗(yàn)確定堿提工藝的最佳條件：提取溫度為25℃，NaOH 濃度為5％，提取時(shí)間為24 h。香菇粗多糖再經(jīng)雙氧水脫色、超濾分級分離得到兩個(gè)精制香菇多糖組分LNT1和LNT2。經(jīng)高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)測得LNT1和LNT2的重均分子量(Mw)分別為605.4 kDa、185.2 kDa；苯酚-硫酸法測得LNT1和LNT2的糖含

3、量分別為95.61％和94.99％；旋光度實(shí)驗(yàn)測得LNT1和LNT2的比旋光度([α]20℃D)分別為+8.30°和+8.77°；紫外掃描實(shí)驗(yàn)表明LNT1和LNT2 不含蛋白質(zhì)和核酸；經(jīng)糖含量和旋光度測定以及凝膠滲透色譜和紫外掃描證實(shí)，本實(shí)驗(yàn)得到的精制香菇多糖LNT1和LNT2 為分子量均一且純度較高的多糖組分，可以進(jìn)行下一步的結(jié)構(gòu)研究。
　　 第二部分:香菇多糖LNT1和LNT2的結(jié)構(gòu)研究
　　 綜合運(yùn)用酸水解、高碘酸

4、氧化、Smith 降解、甲基化等化學(xué)分析法和傅里葉紅外光譜、核磁共振光譜等光譜分析法對LNT1和LNT2的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析；通過剛果紅實(shí)驗(yàn)對LNT1和LNT2的糖鏈構(gòu)象進(jìn)行考察。酸水解實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LNT1和LNT2 僅由D-葡萄糖組成；高碘酸氧化和Smith 降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LNT1和LNT2 含有(1-3)或(1-3-6)、(1-6)或末端連接類型的糖殘基，各連接類型糖殘基的分子摩爾比分別為：2.73:1和2.91:1；甲基化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5、表明LNT1和LNT2 主要含有末端、(1-3)、(1-3-6)連接類型的糖殘基，各連接類型糖殘基的分子摩爾比分別為：1.07:1.56:1.00和1.00:1.70:1.08；傅里葉紅外光譜(FT-IR)分析表明LNT1和LNT2 含有典型的多糖特征吸收峰，且為β構(gòu)型的D-吡喃糖；核磁共振實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LNT1和LNT2 為β構(gòu)型的葡聚糖，其主鏈由1,3-連接的葡聚糖組成，分支點(diǎn)位于6 位，側(cè)鏈由末端葡萄糖殘基組成。剛果紅實(shí)驗(yàn)表明LNT

6、1和LNT2是三股螺旋結(jié)構(gòu)的多糖，隨著NaOH 濃度的增大，糖鏈構(gòu)象由三股螺旋逐漸解旋為無規(guī)則線團(tuán)。綜上所述，LNT1和LNT2是以β-(1-3)-D 葡萄糖為主鏈，6 位上帶有支鏈的葡聚糖，平均每4個(gè)葡萄糖殘基組成的重復(fù)單元含有一個(gè)分支?；窘Y(jié)構(gòu)單元為：
　　 第三部分:香菇多糖LNT1和LNT2的體外抗腫瘤活性研究
　　 采用四甲偶氮唑鹽(MTT)比色法測定LNT1和LNT2 對鼠肝腹水瘤H-22細(xì)胞增殖的抑制率。實(shí)