2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  1、研究IGF-1對高氧誘導(dǎo)的A549細胞周期的影響。
  2、研究IGF-1對A549細胞凋亡及Bax、Bcl-2及caspase-3表達的影響。
  方法:
  l、A549細胞株傳代培養(yǎng)。
  2、分組:Ⅰ組:正常組,Ⅱ組:高氧組,Ⅲ組:高氧+IGF-1低劑量組,Ⅳ組:高氧+IGF-1中劑量組,Ⅴ組:高氧+IGF-1高劑量組等5組。
  3、A549細胞高氧處理及藥物干預(yù):放入CO2

2、恒溫細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察各組細胞動態(tài)生長狀況,待細胞融合至40-50%時,進行IGF-1藥物干預(yù)。
 ?。?)Ⅱ組(高氧組):細胞用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液放入氧濃度85%的封閉箱內(nèi)放入5%CO2、37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h;
 ?。?)藥物干預(yù)組:將Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組細胞用不同劑量IGF-1處理,與高氧組一同放入氧濃度85%封閉箱內(nèi),再放入5%CO2、37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h;
 ?。?)Ⅰ組(

3、正常組):細胞用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液放入5%CO2、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
  4、觀察指標:①采用MTT法檢測細胞存活率;
 ?、诓捎昧魇郊毎麅x分析細胞周期;
 ?、跦E染色觀察細胞的凋亡情況;
  ④采用流式細胞儀AnnexinⅤ-PI熒光雙染法檢測細胞的凋亡;
  ⑤免疫細胞化學(xué)的方法檢測Caspase-3的表達變化。
  ⑥采用流式細胞儀檢測bax、bcl-2表達的水平。
  

4、5、統(tǒng)計學(xué)資料處理方法:
  計量資料用均數(shù)士標準差(x士s)來表示,應(yīng)用 SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,各組數(shù)據(jù)資料服從近似正態(tài)分布,組間比較利用單因素方差分析。P<0.05表明有顯著性的差異,具有統(tǒng)計學(xué)的意義。
  結(jié)果:
  1、細胞存活率測定:與Ⅰ組相比,Ⅱ組A549細胞的存活率明顯降低,差異有顯著性意義(P<0.05);與Ⅱ組相比,Ⅲ組OD值無明顯差異,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);而Ⅳ、Ⅴ組

5、OD值隨著IGF-l藥物濃度的遞增逐漸增大,細胞存活率逐漸升高,與Ⅱ組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
  2、細胞周期分析:與Ⅰ組相比,Ⅱ組A549細胞S、G2-M期的細胞百分比下降,差異均有顯著性意義(P

6、義(P<0.05);G0-G1和G2-M期細胞百分比在不同劑量IGF-Ⅰ組間比較,差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),但是S期細胞百分比在不同劑量IGF-Ⅰ組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),呈劑量依賴性效應(yīng)。
  3、流式細胞儀檢測細胞凋亡:利用AnnexinⅤ-PI雙染法檢測細胞凋亡,結(jié)果Ⅱ組凋亡率較Ⅰ組明顯增多,差異有顯著性意義(P

7、大,其細胞凋亡率呈濃度依賴性降低,差異有顯著性意義(P<0.05)。
  4、流式細胞儀檢測凋亡相關(guān)調(diào)控蛋白Bcl-2、Bax表達情況:與Ⅰ組相比,Ⅱ組A549細胞Bcl-2的蛋白表達水平下降,Bax的表達水平升高,差異均有顯著性意義(p<0.05);與高氧組相比,藥物干預(yù)組A549細胞的Bcl-2的蛋白表達明顯增高,而Bax的表達下降,差異均有顯著性意義(P  

8、5、免疫細胞化學(xué)法分析Caspase-3蛋白表達:與Ⅰ組相比,Ⅱ組A549細胞Caspase-3蛋白表達強度增高(P  結(jié)論:
  1、高氧明顯抑制A549細胞的生長,促進其凋亡。
  2、IGF-1參與高氧誘導(dǎo)A549細胞周期的調(diào)節(jié),導(dǎo)致G1期細胞減少,S期以及G2期細胞增多,并在S期的調(diào)節(jié)上存在劑量依

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