賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌Pim-3相關(guān)分子表達(dá)的對比研究.pdf

1、目的:胃癌位居全球惡性腫瘤死亡原因的第二位，是最常見的消化道惡性腫瘤之一。近年來，在大多數(shù)發(fā)達(dá)國家隨著生活方式的改變胃癌的發(fā)病率有所下降，但與胃癌和食管癌的發(fā)病率逐年下降相比較，胃食管交界部腺癌的發(fā)病率顯著上升。本實驗室前期對河北省食管癌高發(fā)區(qū)磁縣和胃癌高發(fā)區(qū)贊皇縣賁門癌發(fā)病率的調(diào)查研究也得出了相似的結(jié)論，但對這一現(xiàn)象及賁門癌發(fā)病機制的探索目前仍然處于初級階段。
　　 腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素相互作用的結(jié)果。pim家族是新近發(fā)現(xiàn)

2、的一組編碼絲/蘇氨酸蛋白激酶的原癌基因，可通過促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程和抑制凋亡來調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。pim家族由pim-1、pim-2、pim-3組成，它們廣泛分布于人體各組織器官，對正常生長發(fā)育、分化、成熟起重要作用。目前，人們對pim-1和pim-2的探索研究已經(jīng)取得了不少進(jìn)展，但對新成員pim-3研究相對較少。pim-3與pim-1及pim-2的序列相似性分別為57.1％和44.0％，在功能上也頗為相似，均能磷酸化眾多特異性底物，在細(xì)胞

3、周期及細(xì)胞凋亡進(jìn)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。另外，有研究表明許多惡性腫瘤的發(fā)生與pim-3表達(dá)上調(diào)密切相關(guān)。
　　 與pim家族其他成員一樣，pim-3在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)p27kip1的表達(dá)。CDK抑制因子p27kip1已被公認(rèn)是一種新的pim激酶調(diào)節(jié)因子，p27kip1是細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵分子，多種類型的腫瘤及腫瘤相關(guān)進(jìn)程都與p27kip1表達(dá)下調(diào)密切相關(guān)。有文獻(xiàn)報道，5％的p27kip1表達(dá)下調(diào)是由于蛋白水解，而p2

4、7kip1穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)是主要是通過其磷酸化形式而改變的，最終導(dǎo)致p27kip1由核移位到胞漿并推進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)入到S期。Ser10是p27kip1最主要的磷酸化位點(phosphated Ser10 p27kip1)，占據(jù)了總磷酸化位點的70％。
　　 pim-1可以調(diào)控myc基因，pim-1和pim-2在絲/蘇氨酸位點磷酸化c-myc蛋白，從而在c-myc的轉(zhuǎn)錄活動中提高其穩(wěn)定性。另外，pim-3通過激活PGC-1a提高c-my

5、cmRNA表達(dá)，因此，pim激酶通過調(diào)節(jié)c-myc的活性參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。
　　 細(xì)胞增殖依靠細(xì)胞周期的正常運轉(zhuǎn)，通過G1、S、G2和M期的依次推進(jìn)完成細(xì)胞周期進(jìn)程。細(xì)胞周期調(diào)控點在細(xì)胞周期進(jìn)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，調(diào)控G2/M期轉(zhuǎn)換的cdc2(cyclin-dependent kinasel)被認(rèn)為是最重要的調(diào)控蛋白之一，它與cdc25c相互作用，使細(xì)胞周期順利進(jìn)入M期。有文獻(xiàn)報道，pim-1在G2/M轉(zhuǎn)換期對cdc25

6、c的調(diào)節(jié)有兩條途徑，第一，pim-1直接磷酸化cdc25c;第二，pim-1通過磷酸化作用鎖定cdc25c的抑制因子C-TAK1，使其不能發(fā)揮對cdc25c的抑制作用。人類pim-3與pim-1的序列相似性為57.1％，功能上也頗為相似，故可以推斷，pim-3同樣通過直接或間接對cdc25c的調(diào)控作用來促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程。所以我們選擇pim-3、p-p27(phosphated Ser10 p27kip1)、c-myc、cdc2及cdc2

7、5c五個因子來進(jìn)行研究，其在賁門癌及遠(yuǎn)端胃癌的對比研究尚未見報道。
　　 研究發(fā)現(xiàn)，賁門癌和其他部位的胃癌相比，腫瘤表現(xiàn)出更為活躍的生物學(xué)行為，如浸潤程度更深、更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良。有學(xué)者提出，賁門癌可能是胃癌中的一種獨特亞型。因此，全面了解賁門癌的病因、發(fā)病機制、免疫表型和生物學(xué)行為對于預(yù)防、早期診斷和綜合治療賁門癌是尤為重要的。但目前我國有關(guān)對比研究賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌的發(fā)病機制、分子遺傳學(xué)等方面的差異尚處于初期，尚不清

8、楚賁門癌發(fā)病率較遠(yuǎn)端胃癌逐年增高的原因，對比研究不同部位胃腺癌基因表達(dá)的差異有助于進(jìn)一步揭示賁門癌的發(fā)病機制。
　　 本研究采用免疫組化學(xué)方法檢測pim-3、p-p27(phosphated Ser10 P27kip1)、c-myc、cdc2和cdc25c在賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌中的表達(dá)情況，探討其在賁門腺癌及遠(yuǎn)端胃腺癌中病理意義的差異，對比研究兩部位腫瘤在發(fā)病機制及免疫表型方面可能存在的差異。
　　 方法:采用免疫組織化學(xué)S

9、P法，對比分析78例賁門癌和62例遠(yuǎn)端胃癌pim-3、p-p27、c-myc、cdc2和cdc25c的表達(dá)情況，探討其與臨床病理特征的相關(guān)性及五者之間的相互作用關(guān)系，20例正常胃黏膜作為對照。統(tǒng)計分析運用SPSS17.0軟件，數(shù)據(jù)采用x2檢驗、Fisher確切概率法及相關(guān)分析等方法進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、pim-3蛋白表達(dá)及臨床病理意義
　　 1.1、賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌pim-3蛋白的表達(dá)情況

10、>　　 pim-3蛋白陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。20例正常胃黏膜中有4例呈陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為20.0％。78例賁門癌和62例遠(yuǎn)端胃癌中pim-3陽性表達(dá)均為50例，陽性表達(dá)率分別為64.1％和80.6％，均明顯高于正常胃黏膜(P＜0.05）。賁門癌pim-3陽性表達(dá)率明顯低于遠(yuǎn)端胃癌(64.1％vs80.6％,P＜0.05)。
　　 1.2、pim-3蛋白在賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌表達(dá)的臨床病理意義比較
　　 p

11、im-3在賁門癌高-中分化組的陽性表達(dá)率為38.5％，明顯低于低分化組(76.9％，P＜0.05)。T1/T2分期組中pim-3的陽性率為48.5％，明顯低于T3/T4分期組(75.6％，P＜0.05)，但其表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P＞0.05)。
　　 pim-3蛋白在遠(yuǎn)端胃癌的陽性表達(dá)分別與患者的分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（高/中分化:56.3％vs低分化:89.1％;腫瘤分期T1/T2:6

12、5.5％vsT3/T4:94.0％;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性:60.0％vs陽性:94.6％，P＜0.05）;但與年齡、性別、腫瘤大小均無關(guān)(P＞0.05)。
　　 研究結(jié)果提示，賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌pim-3的過表達(dá)參與了腫瘤的發(fā)生，但其臨床病理意義存在異同。pim-3過表達(dá)與賁門癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，而與遠(yuǎn)端胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。pim-3過表達(dá)與兩部位腫瘤的分化程度及腫瘤分期顯著相關(guān)，都表現(xiàn)為分化越低、分期越晚，pim-3表達(dá)越高。<

13、br>　　 2、p-p27蛋白表達(dá)及臨床病理意義
　　 2.1、賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌p-p27蛋白表達(dá)情況
　　 p-p27蛋白陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)。p-p27在賁門癌組陽性表達(dá)率為42.3％，在遠(yuǎn)端胃癌組的陽性表達(dá)率為61.3％，均明顯高于正常胃黏膜對照組(5.0％，P＜0.05)。賁門癌中p-p27陽性表達(dá)率明顯低于遠(yuǎn)端胃癌(P＜0.05）。
　　 2.2、p-p27蛋白在賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌表達(dá)的臨床

14、病理意義比較。
　　 p-p27蛋白在賁門癌組的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）。
　　 p-p27蛋白在遠(yuǎn)端胃癌組的表達(dá)與腫瘤分化程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。低分化組(69.6％)明顯高于高/中分化組(37.5％，P＜0.05);T3/T4分期組(78.8％)明顯高于T1/T2分期組（41.4％，P＜0.05），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(44.0％)明顯低于伴淋巴

15、結(jié)轉(zhuǎn)移組(73.0％，P＜0.05)，但其表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小均無關(guān)（P＞0.05）。
　　 研究結(jié)果提示，賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌p-p27蛋白均有不同程度的過表達(dá)，而且遠(yuǎn)端胃癌更明顯。p-p27的表達(dá)與賁門癌的各項病理參數(shù)均無相關(guān)性，而與遠(yuǎn)端胃癌的分化程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。
　　 3、c-myc蛋白表達(dá)及臨床病理意義
　　 3.1、賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌c-myc蛋白的表達(dá)情況
　　 c-m

16、yc蛋白陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)。78例賁門癌中有33例陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為42.3％，62例遠(yuǎn)端胃癌中有41例陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為66.1％，兩者均顯著高于正常胃黏膜組(15.0％，P＜0.05)，賁門癌組c-myc陽性表達(dá)率明顯低于遠(yuǎn)端胃癌組(P＜0.05）。
　　 3.2、c-myc蛋白在賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌表達(dá)的臨床病理意義比較
　　 c-myc蛋白在賁門癌組的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、腫

17、瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）。
　　 c-myc蛋白在遠(yuǎn)端胃癌T3/T4分期組的陽性表達(dá)率顯著高于T1/T2分期組(84.8％vs44.8％，P＜0.05)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組c-myc陽性表達(dá)率顯著低于伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(48.0％vs78.4％，P＜0.05)，但其表達(dá)與患者年齡、性別及腫瘤大小均無相關(guān)性（P＞0.05）。
　　 研究結(jié)果提示，c-myc蛋白在遠(yuǎn)端胃癌中的表達(dá)與腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，

18、而賁門癌c-myc的表達(dá)與其均無相關(guān)性。
　　 4、cdc2蛋白表達(dá)及臨床病理意義
　　 4.1、賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌cdc2蛋白的表達(dá)情況
　　 cdc2蛋白陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核。正常胃黏膜陽性率為25.0％。賁門癌組陽性表達(dá)率為74.4％，遠(yuǎn)端胃癌組cdc2蛋白的陽性表達(dá)率為72.6％，兩組陽性率均明顯高于正常胃黏膜組（25.0％，P＜0.05）。賁門癌與遠(yuǎn)端胃癌cdc2陽性表達(dá)率無明顯差異（P＞0.05）。

19、r>　　 4.2、cdc2蛋白在賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌表達(dá)的臨床病理意義比較
　　 cdc2蛋白在賁門癌組和遠(yuǎn)端胃癌組的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）。
　　 5、cdc25c蛋白表達(dá)及臨床病理意義
　　 5.1、賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌cdc25c蛋白的表達(dá)情況
　　 cdc25c蛋白陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞核，正常胃黏膜陽性表達(dá)率為30.0％。賁門癌組及遠(yuǎn)端胃

20、癌組cdc25c蛋白陽性表達(dá)率分別為85.9％和74.2％，均明顯高于正常黏膜組（30％，P＜0.05），但兩者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 5.2、cdc25c蛋白在賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌中表達(dá)的臨床病理意義
　　 cdc25c蛋白在賁門癌組和遠(yuǎn)端胃癌組的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）。
　　 6、賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌pim-3、p-p27、c-

21、myc、cdc2和cdc25c蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　 pim-3與p-p27的表達(dá)在賁門癌組和遠(yuǎn)端胃癌組均呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.316，P=0.005;r=0.533，P=0.000);p-p27與c-myc的表達(dá)在賁門癌組和遠(yuǎn)端胃癌組均呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.370，P=0.001;r=0.481，P=0.000);c-myc與pim-3的表達(dá)在賁門癌組和遠(yuǎn)端胃癌組均呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.424，P=0.000;r=0.598,P

22、=0.000)
　　 結(jié)論:
　　 1、pim-3、p-p27、c-myc、cdc2和cdc25c的過表達(dá)參與了賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌的發(fā)生。
　　 2、pim-3、p-p27和c-myc在賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌的表達(dá)存在差異，賁門癌中表達(dá)較弱，提示pim-3參與調(diào)控的p-p27和c-myc在兩者中的作用程度并不完全相同，在遠(yuǎn)端胃癌中的作用更明顯。
　　 3、賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌的cdc2和cdc25c表達(dá)未見明顯差異，