胰腺星狀細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及其早期活化機制的實驗研究.pdf

1、目的：通過腹主動脈插管灌注膠原酶消化分離胰腺星狀細胞(pancreatic stellate cell，PSC)，建立簡單易行的PSC分離方法，并對PSC進行培養(yǎng)和鑒定；初步探討PSC早期活化的機制。 方法：大鼠腹主動脈插管灌注后，經膠原酶消化、Nycodenz密度梯度離心，分離得到PSC；通過觀察細胞形態(tài)、胞質內脂滴和免疫細胞化學方法檢測結蛋白(desmin)、神經膠質酸纖維蛋白(glial fibrillary acidic

2、 protein，GFAP)、α平滑肌肌動素(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表達來鑒定PSC；RT-PCR方法方法及WestBlot方法測定PSC中Smad2/3表達。 結果：腹主動脈灌注法分離得到PSC，產率、活力和純度分別為：15.3±4.6×103/g體重、95.0±3.5％、>80％；培養(yǎng)24后大多數細胞已貼壁，呈星狀或多角形，48h后表達desmin、GFAP，并在96h后表達α-SMA；S