糖化終末產(chǎn)物對體外培養(yǎng)胰腺星狀細胞的影響及其機制研究.pdf

1、胰腺星狀細胞是位于胰腺小葉間和腺泡周圍的間質(zhì)細胞，正常情況下其處于靜息狀態(tài)，僅合成少量的III型膠原等細胞外基質(zhì)成分，與維持胰腺的正常組織結(jié)構(gòu)有關(guān)。近來研究表明，靜息狀態(tài)的胰腺星狀細胞在前炎癥細胞因子、乙醇代謝物和氧化應激等損傷因素的作用下可被活化，活化的胰腺星狀細胞是胰腺細胞外基質(zhì)形成的主要來源，在胰腺纖維化病變中起著核心作用。有趣的是，研究發(fā)現(xiàn)隨著糖尿病病程的進展在胰島周圍的纖維化區(qū)域常伴隨有胰腺星狀細胞的活化，但其活化的具體機制還

2、不十分清楚。糖化終末產(chǎn)物水平的升高是糖尿病的重要特征，其能通過特異性受體誘導多種細胞的轉(zhuǎn)分化和細胞外基質(zhì)的合成，在糖尿病纖維化病變中起著重要作用。本研究感興趣的是胰腺星狀細胞是否也是糖化終末產(chǎn)物的靶目標？ 第一部分、糖化終末產(chǎn)物受體在胰腺星狀細胞上的表達。 目的: 研究胰腺星狀細胞是否表達特異性RAGE受體，并探討糖化終末產(chǎn)物對RAGE表達的調(diào)節(jié)作用。 方法: 分離培養(yǎng)SD大鼠胰腺星狀細胞,采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶

3、鏈反應和免疫細胞化學檢測靜息和活化的胰腺星狀細胞RAGE在mRNA和蛋白水平的表達；同時本實驗用小牛血清制備了外源性糖化終末產(chǎn)物并用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應檢測糖化終末產(chǎn)物對RAGE mRNA表達的影響。 結(jié)果: 靜息和活化的胰腺星狀細胞均表達RAGE，且活化后表達水平提高；糖化終末產(chǎn)物能上調(diào)RAGE的表達。 結(jié)論: 靜息和活化的胰腺星狀細胞均表達RAGE，活化的胰腺星狀細胞RAGE表達上調(diào)，提示胰腺星狀細胞是糖化終末產(chǎn)

4、物作用的靶細胞，且糖化終末產(chǎn)物對胰腺星狀細胞的影響可能存在正反饋作用。 第二部分、糖化終末產(chǎn)物對體外培養(yǎng)胰腺星狀細胞的影響及其機制。 目的：探討糖化終末產(chǎn)物對大鼠胰腺星狀細胞活化的影響及其可能機制。 方法：取第2代細胞為研究對象，不同濃度糖化終末產(chǎn)物干預胰腺星狀細胞24h后，采用活性氧捕獲劑雙氫溴乙啶和雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃孵育細胞,分別通過熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測細胞內(nèi)的熒光強度來反映細胞內(nèi)活性氧水平；以α

5、平滑肌激動蛋白和I型膠原作為胰腺星狀細胞活化標志，用熒光實時定量PCR和蛋白免疫印跡方法檢測糖化終末產(chǎn)物刺激24h后α平滑肌激動蛋白的表達水平,用酶聯(lián)免疫法檢測培養(yǎng)細胞上清液中I型膠原的分泌。 結(jié)果：糖化終末產(chǎn)物能劑量依賴性的促進胰腺星狀細胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生，而且糖化終末產(chǎn)物刺激后α平滑肌激動蛋白和I型膠原的表達增加，但用N-乙酰半胱氨酸抑制細胞內(nèi)活性氧水平后二者的表達水平都明顯下降，差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：