巴比二氏綜合癥家系致病基因的篩選、定位及測序.pdf

1、目的：對中國漢族2個巴比二氏綜合癥(Bardet-Biedl Syndrome，BBS)遺傳性疾病家系進(jìn)行遺傳連鎖分析及基因測序，篩選鑒定新致病基因位點(diǎn)和/或新致病基因及鑒定已知基因的新突變，以確認(rèn)致病基因并闡明致病機(jī)理。 方法： 1.采集中國漢族2個巴比二氏綜合癥遺傳性疾病家系的臨床資料和血樣標(biāo)本，提取血樣標(biāo)本中DNA，建立病人的臨床信息數(shù)據(jù)庫。 2.針對巴比二氏綜合癥遺傳性疾病的己知基因，設(shè)計引物進(jìn)行測序，排

2、除或定位于已知基因。應(yīng)用遺傳連鎖方法，選擇己知位點(diǎn)及已知基因物理位置附近的STR(short tandom repeat markers)標(biāo)記物進(jìn)行已知基因及已知位點(diǎn)的篩查。 3.對是已知位點(diǎn)和基因的家系的陽性位點(diǎn)附近有連鎖的，在其附近進(jìn)行進(jìn)一步的遺傳間距更近的遺傳連鎖分析；對排除己知位點(diǎn)及基因的家系，用382個STR標(biāo)記物(ABI PRISMLinkage Mapping Sets V2.5-MD)，PCR擴(kuò)增其片段，采用AB

3、I3100遺傳分析儀進(jìn)行全基因組的掃描。 4.用國際公認(rèn)的遺傳連鎖分析方法，根據(jù)等位基因(單倍體)分型結(jié)果，應(yīng)用兩點(diǎn)法，分別計算STR標(biāo)記物的LOD值(Lod Score值，表明疾病基因與該位點(diǎn)連鎖的緊密性大小)，以最大LOD值確定陽性位點(diǎn)。 5.在陽性位點(diǎn)附近，根據(jù)熒光標(biāo)記的STR(single nucleotide polymophism)基因型檢測結(jié)果，進(jìn)行更精細(xì)定位，確定疾病基因的最小遺傳間距MGI(Minimu

4、m GeneticInterval)。在MGI內(nèi)，通過候選基因法篩選其致病基因及突變。 結(jié)果： 1.建立了中國漢族巴比二氏綜合癥遺傳性疾病家系的臨床及臨床信息數(shù)據(jù)庫。 2.完成了對1個巴比二氏綜合癥(Bardet-BiedlSyndrome，BBS)疾病家系是已知基因BBS7的連鎖定位和測序，發(fā)現(xiàn)其是已知基因的新突變，為BBS致病機(jī)制的進(jìn)一步闡明提供了依據(jù)。 3.完成對1個BBS遺傳性疾病家系是已知基因B