應(yīng)用外顯子組測序鑒定一個汗孔角化癥家系的致病基因.pdf

1、汗孔角化癥(porokeratosis，PK)是一種特殊的皮膚角化異常，最早在1893年由Mibelli報道。該病的皮損為環(huán)形或不規(guī)則形的斑片，邊緣清晰且呈堤狀隆起，中央部分平滑干燥，輕度萎縮。皮損呈褐色或淺褐色，多出現(xiàn)在四肢、面部、頸部等處，口腔粘膜甚至角膜也可累及。汗孔角化病分為4-6種亞型，彌漫性淺表性光敏性汗孔角化癥(disseminated superficial actinic porokeratosis, DSAP)是一種

2、相對常見的PK亞型，一般在10歲以后發(fā)病，該亞型的皮損較小、淺表性、成簇狀，主要累及曝光部位。紫外線照射、免疫抑制和炎癥等因素均有可能加重或誘發(fā)DSAP病情。
　　 汗孔角化癥的病因至今未知，作為一種外顯不全并具有遺傳異質(zhì)性的顯性遺傳病，目前已經(jīng)定位了四個DSAP致病基因位點:12q23.2-24.1，15q25.1-26.1，1p31.3-31.1和16q24.1-24.3。人們對位于這些區(qū)間的多個基因，如CRY1，C4ST1

3、，TXNRD1，HCF2進(jìn)行了突變篩查，但至今未發(fā)現(xiàn)DSAP的致病基因。
　　 本研究的對象是三個DSAP家系（簡稱為家系1、家系2和家系3），家系1和家系3均來自湖南，家系2來自安徽淮南，我室曾通過全基因組掃描和連鎖分析的方法對家系1和家系2進(jìn)行了研究，并將DSAP1位點定位在D12S338至D12S1605之間4.4cM的區(qū)間;同時，我們采用候選克隆技術(shù)對定位于該區(qū)間的CRY1、C4ST1、TXNRD1、HCF2、CMKLR

4、1和KIAA0789基因進(jìn)行突變篩查，但均未發(fā)現(xiàn)與DSAP共分離。2009年來，外顯子捕獲和新一代測序技術(shù)為單基因病致病基因的克隆提供了新的策略。此次研究中，我們在家系1中選取兩個患者和一個非患者，應(yīng)用外顯子組測序的方法分析他們所有外顯子序列，結(jié)合我們以前對該家系連鎖分析的結(jié)果，尋找DSAP的致病基因。然后我們運用Sanger測序法在三個家系中分別驗證外顯子組測序的實驗結(jié)果，以期發(fā)現(xiàn)DSAP致病基因。
　　 外顯子組測序結(jié)果顯示

5、，家系1兩名患者的MVK基因存在c.566C＞T的突變，該突變導(dǎo)致第189位氨基酸ALA＞VAL的改變。為了驗證我們的發(fā)現(xiàn)，又通過Sanger測序法在家系1、家系2和家系3中對MVK基因進(jìn)行了突變篩查，發(fā)現(xiàn)MVK基因在3個家系的所有患者中均存在突變:家系1中突變結(jié)果與外顯子組測序結(jié)果一致，家系2中存在c.1039+2T＞C改變，家系3中存在突變c.935A＞G。所有的這些突變在家系非患者中均未出現(xiàn)，提示MVK基因是DSAP的致病基因。<