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1、目的:研究己酮可可堿對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的急性肺損傷肺微血管通透性的保護(hù)及其機(jī)制.方法:實(shí)驗(yàn)分為兩部分(1)在體部分:靜脈注射內(nèi)毒素(LPS)復(fù)制大鼠急性肺損傷模型,觀察動(dòng)脈血氧分壓、支氣管肺泡灌洗液(BALF)檢查、肺微血管通透性指數(shù)(PMPI)及肺組織學(xué)檢查等指標(biāo)的變化,了解己酮可可堿(PTX)對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷肺微血管通透性的影響.(2)離體部分:以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為培養(yǎng)對(duì)象,復(fù)制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞單層損傷模型,并以?xún)?nèi)皮單層濾
2、過(guò)系數(shù)(Kf)和蛋白質(zhì)滲透壓反射系數(shù)(osmotic reflection coefficient,σ)為檢測(cè)指標(biāo),了解己酮可可堿對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性的影響;以Western印跡雜交技術(shù)檢測(cè)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞p38絲裂原激活蛋白激酶(Mitogenactivated protein kinase,MAPK)活性,觀察PTX對(duì)p38 MAPK的活性影響;以考馬斯藍(lán)雙抽提染色法、肌動(dòng)蛋白(Actin)免疫組織化學(xué)技術(shù)、F-Actin熒光染色法
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