小兒再發(fā)性腹痛的脾胃濕熱證與腸道微生態(tài)關(guān)系的研究.pdf

1、再發(fā)性腹痛(recurrent abdominal pain，RAP)是嚴(yán)重影響小兒身心健康的兒科臨床最常見的臨床疾病之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚未闡明RAP的發(fā)病機(jī)制，西藥對(duì)RAP的療效也不理想。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥治療RAP均有一定的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)。RAP在臨床上表現(xiàn)出不同的證型特點(diǎn)，在嶺南地區(qū)脾胃濕熱證患兒比較多見。 一、文獻(xiàn)研究: 1．小兒再發(fā)性腹痛的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)RAP的定義 最早由英國(guó)學(xué)者Apley和Naish提出，即發(fā)

2、作性的腹痛，病程至少3個(gè)月以上，病程中至少有3次以上的腹痛發(fā)作，發(fā)作嚴(yán)重時(shí)可影響小兒正常的活動(dòng)，而在發(fā)作間歇期，表現(xiàn)正常。國(guó)內(nèi)外的多項(xiàng)研究都發(fā)現(xiàn)，其發(fā)病率高，雖器質(zhì)性因素引起者不多，但由于反復(fù)發(fā)作，長(zhǎng)期持續(xù)，嚴(yán)重影響患兒的身心健康及其家庭的正常生活。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于RAP發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)尚未明確，胃腸動(dòng)力功能失調(diào)、小腸通透性改變、幽門螺桿菌感染、自主神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)、心理因素、內(nèi)臟高敏感性等被認(rèn)為可能與RAP的發(fā)病相關(guān)，但目前還沒有

3、能得到大多數(shù)學(xué)者贊同的假說。 對(duì)于RAP 的治療，國(guó)內(nèi)外學(xué)者們先后嘗試應(yīng)用H<,2>受體阻滯劑、5-HT 受體阻滯劑、促動(dòng)力藥、微生態(tài)制劑、植物制劑、飲食療法、行為療法等，但能證明在RAP治療中有效的藥物或治療措施并不多。 近年來，隨著對(duì)胃腸功能性疾病研究的深入，多國(guó)專家工作組制定了羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于 RAP 這類疾病重新進(jìn)行了定義，但臨床實(shí)際也發(fā)現(xiàn)其存在一些嚴(yán)重的缺陷，Von Bayer 和 Walker 對(duì) RAP 定

4、義進(jìn)行了修訂，Christensen強(qiáng)調(diào)“上部”和“下部”癥狀區(qū)分的重要性，并據(jù)此為RAP分型。筆者分析了這些觀念的變遷，并提出了自己對(duì)RAP定義、范圍的看法。 2．小兒再發(fā)性腹痛的中醫(yī)藥研究 現(xiàn)存中醫(yī)古典文獻(xiàn)中雖然并無類似“再發(fā)性腹痛”的概念，然而，不少文獻(xiàn)中對(duì)小兒腹痛的病因病機(jī)、診治方法及方藥選擇的闡述卻為后人治療再發(fā)性腹痛建立了理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。近二十年來，各地的中醫(yī)藥學(xué)者對(duì)RAP的病因病機(jī)和辨證論治都做了大量的研究

5、，嘗試應(yīng)用溫中行氣法、消食導(dǎo)滯法、運(yùn)脾和胃法、健脾補(bǔ)氣法、調(diào)和肝脾法、清熱祛濕法及外治、針灸推拿療法等治療RAP，取得了不錯(cuò)的療效，筆者分析了這些文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)RAP的證型分布可呈現(xiàn)不同的特點(diǎn)，可能由于氣候、飲食及小兒生理等方面的特點(diǎn)，嶺南地區(qū)很多RAP患兒表現(xiàn)出脾胃濕熱的證候特點(diǎn)。 3．腸道微生態(tài)及其與胃腸道功能性疾病、脾胃濕熱證的關(guān)系 人體的胃腸道棲息著大量微生物，相互間保持共生或拮抗關(guān)系，構(gòu)成了宿主小生境特定的

6、微生態(tài)系統(tǒng)，當(dāng)受宿主及外環(huán)境影響，平衡遭到破壞，就出現(xiàn)菌群失調(diào)，使宿主致病。研究發(fā)現(xiàn)腸道微生態(tài)的失調(diào)與多種胃腸道疾病的發(fā)病相關(guān)，近年來其與胃腸道功能性疾病的關(guān)系受到重視，但迄今尚少見有小兒胃腸道功能性疾病特別是RAP與腸道微生態(tài)關(guān)系的研究報(bào)道。導(dǎo)師勞紹賢教授等在對(duì)既往研究分析總結(jié)的基礎(chǔ)上，提出胃腸微生態(tài)平衡是脾主運(yùn)化的基礎(chǔ)，微生態(tài)失衡可導(dǎo)致脾胃運(yùn)化功能失調(diào)，水濕內(nèi)停，濕聚生熱，使胃腸道內(nèi)環(huán)境變化，表現(xiàn)出脾胃濕熱證的臨床證候。通過對(duì)以慢性

7、胃炎、腹瀉型IBS等為代表的胃腸道疾病的胃腸道微生態(tài)的相關(guān)指標(biāo)及證候指征變化的研究，發(fā)現(xiàn)在上述胃腸道疾病的脾胃濕熱證中，患者的腸道不僅存在菌群失調(diào)，而且與脾虛證之間存在差異。這些開創(chuàng)性的研究為從微生態(tài)角度研究脾胃濕熱證奠定了良好的基礎(chǔ)。但是研究也發(fā)現(xiàn)了傳統(tǒng)的通過菌培養(yǎng)、顯微鏡下菌細(xì)胞記數(shù)的方法所存在的缺陷，對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn)提出了新的要求。 4．熒光定量PCR技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展 使腸道微生態(tài)的研究方法取得了很大的進(jìn)步

8、。本論文實(shí)驗(yàn)所采用的實(shí)時(shí)熒光定量PCR (FQ-PCR)技術(shù)具有定量范圍寬，特異性強(qiáng)，操作快速，技術(shù)簡(jiǎn)單、安全等諸多優(yōu)點(diǎn)，是對(duì)腸道特定菌群定量的理想方法。 5、研究背景及研究思路 RAP的臨床表現(xiàn)除了腹痛外，也常伴隨大便次數(shù)及性狀改變、腹脹、食量減少等，這些癥狀在其他已被證實(shí)與腸道菌群失調(diào)相關(guān)的胃腸道疾病中同樣存在，而微生態(tài)制劑治療RAP的臨床療效也提示腸道微生態(tài)可能與RAP的發(fā)病相關(guān)。糞便標(biāo)本中雙歧桿菌、腸桿菌含量及其

9、比值(B/E值)對(duì)于反映腸道微生態(tài)平衡有重要價(jià)值，故本項(xiàng)研究選擇其作為檢測(cè)指標(biāo)。既往研究所發(fā)現(xiàn)的脾胃濕熱證中腸道菌群變化的特點(diǎn)是否在小兒RAP的研究中得到驗(yàn)證，也是本項(xiàng)研究的重要目的。 二、實(shí)驗(yàn)研究: 1、研究目的：研究小兒再發(fā)性腹痛的脾胃濕熱證與腸道微生態(tài)的關(guān)系. 2、研究方法：研究對(duì)象為24例6～12歲再發(fā)性腹痛(RAP)患兒，其中脾胃濕熱證組12例，脾虛證組12例，另選12例同年齡段的正常健康兒童為對(duì)照組，

10、應(yīng)用基于Taqman 技術(shù)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，對(duì)研究對(duì)象糞便標(biāo)本中的腸道厭氧菌代表——雙歧桿菌(Bifidobacteria)和需氧菌代表——腸桿菌 (Escherichiacoli)DNA進(jìn)行熒光定量，比較各組間糞便標(biāo)本中相應(yīng)微生態(tài)檢測(cè)指標(biāo)的變化及其與RAP主要臨床癥狀和脾胃濕熱證主要臨床證候的關(guān)系。 3、研究結(jié)果：RAP 患兒病例組糞便標(biāo)本中的雙歧桿菌含量顯著低于正常兒童組(P<0.01)，而腸桿菌含量則顯著高于正常兒童

11、組(P<0.01)，B/E值也顯著低于正常兒童組 (P<0.01)。腹痛程度與B/E值之間有比較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.838，P=O)，大便次數(shù)增加、大便稀爛程度與雙歧桿菌的含量都有比較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.752，P=0及相關(guān)系數(shù)=-0.725，P=0)，腹脹頻率與雙歧桿菌的含量呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)關(guān)系 (相關(guān)系數(shù)=-0.931，P=0)。另一方面，脾胃濕熱證組的雙歧桿菌和腸桿菌含量均顯著高于脾虛組(P<0.01及 P<

12、0.05)，B/E 值也較脾虛證組高 (P<0.01)；脾胃濕熱證組雙歧桿菌與腸桿菌含量之間有強(qiáng)正相關(guān)關(guān)系 (相關(guān)系數(shù)=0.916，P=0)，而脾虛證組兩者間則無顯著相關(guān)關(guān)系 (相關(guān)系數(shù)=0.416，P=0.179)；脾胃濕熱證組腹痛程度與B/E值之間有比較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.772，P=0.003)，而脾虛證組兩者間則無顯著相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.462，P=0.131)；脾胃濕熱證組大便次數(shù)增加與雙歧桿菌含量之間有比

13、較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.753，P=0.005)，與脾虛證組中兩者間的關(guān)系近似(相關(guān)系數(shù)=-0.825，P=0.001)；脾胃濕熱證組大便稀爛程度與雙歧桿菌含量之間有比較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.768，P=0)，與脾虛證組中兩者間的關(guān)系也近似(相關(guān)系數(shù)=-0.892，P=0.001)；脾胃濕熱證組腹脹頻率與雙歧桿菌含量之間有強(qiáng)負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.928，P=0)，與脾虛證組中兩者間的關(guān)系近似(相關(guān)系數(shù)=-0

14、.933，P=0)，但脾胃濕熱證組腹脹頻率與腸桿菌含量之間也有比較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.876，P=0)，而脾虛證組兩者之間則無顯著相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.476，P=0.118)；脾胃濕熱證組食量減少與雙歧桿菌含量之間僅有弱負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.611，P=0.035)，而脾虛證組兩者間則有比較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)=-0.883，P=0)；脾胃濕熱證組舌苔黃膩程度與B/E 值之間也有比較明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)

15、系數(shù)=-0.749，P=0.005)。 4、研究結(jié)論： (1)小兒RAP患兒存在腸道微生態(tài)失調(diào)；在主要臨床癥狀中，腹痛程度與B/E 值下降相關(guān)，大便次數(shù)增加、大便稀爛程度及腹脹頻率與雙歧桿菌含量減少相關(guān)。 (2)脾胃濕熱證與脾虛證組的腸道菌群失調(diào)表現(xiàn)出不同的特點(diǎn)，與主要證候的相關(guān)性也不一致：較諸脾虛證，脾胃濕熱證表現(xiàn)出雙歧桿菌與腸桿菌含量的相關(guān)性高，B/E值與腹痛程度、腸桿菌含量與腹脹頻率的相關(guān)性高也是脾胃濕熱證

16、較諸脾虛證不同的腸道菌群變化特點(diǎn)；而雙歧桿菌含量與食量減少的相關(guān)性高則是脾虛證與脾胃濕熱證不同的特點(diǎn)；此外，脾胃濕熱證也表現(xiàn)出舌苔黃膩程度與腸道菌群失調(diào)的相關(guān)性。 論文最后分析了研究的不足之處，并展望了今后的研究方向，主要有： (1)從臨床研究的角度，可以考慮將整個(gè)小兒胃腸功能性疾病視為一“疾病簇”，研究其各種臨床表現(xiàn)與可能相關(guān)的客觀指標(biāo)的關(guān)系。 (2)除糞便標(biāo)本外，利用腸鏡技術(shù)同時(shí)檢測(cè)腸道粘膜不同部位的菌群，可