膿毒癥早期大鼠相對腎上腺皮質(zhì)功能不全及地塞米松干預的影響.pdf

1、目的：膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒癥休克以及相繼出現(xiàn)的多器官功能障礙綜合癥是危重病患者死亡最常見的原因。諸多文獻報道，伴隨膿毒癥的進一步發(fā)展，循環(huán)系統(tǒng)、肝臟、腎臟及胃腸等器官以及內(nèi)皮細胞的功能相繼受到影響，在這種不利條件下腎上腺的功能也相應受到影響。Zaloga報道危重患者相對腎上腺皮質(zhì)功能不全的總體發(fā)病率為30％，而膿毒休克患者可達50％-60％。伴隨腎上腺皮質(zhì)功能不全的發(fā)生是否存在相應的器質(zhì)性改變，國內(nèi)外尚無明確報道。膿毒癥、休克等強應

2、激時腎上腺皮質(zhì)分泌的皮質(zhì)醇增多，但對于疾病的嚴重程度而言仍相對不足。外源性的糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids，GC)可以作用于下丘腦-垂體-腎上腺軸fhvoothalamic-pituitary-adrenal axis，HPAA)的各個層面，使血漿皮質(zhì)醇濃度上升，從而對應激反應起到一個內(nèi)在的調(diào)節(jié)作用，使機體通過多種機制對危重病患者起保護作用。但不同疾病，糖皮質(zhì)激素應用的時間、劑量、療程不同，療效亦各不相同。本研究觀察不同時間

3、、應用相同劑量(小劑量)地塞米松對膿毒癥早期合并相對腎上腺皮質(zhì)功能不全的大鼠血清腫瘤壞死因子-a(tumour necrosis factor-a，TNF-a)和白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)生成的影響，并通過觀察下丘腦、垂體、腎上腺組織的超微結構判斷HPAA的功能不全是否伴隨結構改變，病變在哪個部位，以期為臨床積極治療膿毒癥及膿毒癥休克提供有利的實驗依據(jù)。 方法：動物模型采用盲腸結扎穿孔法(cecal

4、ligation andouncture，CLP、)復制，小劑量促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)刺激試驗評價膿毒癥動物的腎上腺皮質(zhì)功能。實驗動物選擇健康雄性清潔級wistar大鼠155只(607123)，體重250～300g，隨機分為5組：(1)正常對照組(n=10)；(2)假手術組(n=25)：僅打開腹腔不做CLP；(3)模型組(n=50)：僅做cLP；(4)預防組(n=50)：CL

5、P術前即刻腹腔注射地塞米松10mg/kg；(5)治療組(n=20)：cLP術后7h腹腔注射地塞米松10mg/kg。第(2)、(3)、(4)組設CLP術后2h、4h、6h、8h、12h五個時間點，每個時間點10只大鼠(假手術組5只)，第(5)組僅8h、12h兩個時間點。所有大鼠均于CLP后6h腹腔注射ACTH 0.8μg/kg，于注射前、注射后30min由頸總動脈測壓管采血，分別記做T<,0>、T<,30>，留取血清，-70℃凍存，采用液

6、相平衡放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)測定血清中皮質(zhì)醇含量。同時，各組大鼠均按時間點采血，留取血清，-70℃凍存，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定血清中TNF-a和IL-6含量。此外，隨機選取相同環(huán)境下飼養(yǎng)的正常大鼠2只，模型組、治療組和預防組12h大鼠各2只于CLP術后12h應用1％多聚甲醛行主動脈灌注固定，取下丘腦、垂體、腎上腺做電鏡

7、切片觀察組織超微結構變化。用SPSS11.5統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，各組均數(shù)的比較行兩組獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果 1 地塞米松干預對大鼠血清皮質(zhì)醇含量的影響模型組(13.8±4.4ng/ml)、預防組(20.8±6.6ng/ml)和治療組(12.6±3.1ng/ml)的T<,0>分別高于正常對照組(9.8±2.3n∥血)和假手術組(8.3±2.1ng/m

8、l，(P<0.05)；預防組T<,0>分別高于模型組和治療組(P<0.05)。 正常對照組(4.1±1.6ng/ml)和假手術組(1.7±3.5ng/ml)的△T(TM<,30>-T<,0>)高于模型組(-0.3±3.7ng/ml)、預防組(-0.2±3.9ng/ml)和治療組(-0.6±2.0ng/ml)(P<0.05)；模型組、預防組和治療組△T差別無統(tǒng)計學意義。 2 地塞米松干預對大鼠血清中TNF-a、IL-6含量

9、的影響模型組中血清TNF-a含量在2h(19.36±4.43pg/ml)達峰值，以后逐漸下降，IL-6含量在CLP術后呈逐漸上升趨勢，峰值出現(xiàn)較TNF-a延后。模型組除8h外，血清TNF-a、IL-6含量均較其余4組明顯升高，模型組和治療組8h時血清TNF-a、IL-6差別均無統(tǒng)計學意義；預防組血清TNF-a在8h、12h含量低于治療組(P<0.01)，且在各時間點均不高于假手術組(P>0.05)。 3 下丘腦、垂體、腎上腺皮質(zhì)

10、電鏡結構改變模型組、預防組和治療組大鼠下丘腦室旁核細胞、垂體ACTH細胞、腎上腺皮質(zhì)束狀帶細胞均出現(xiàn)脂質(zhì)耗減、髓鞘樣小體以及管泡狀嵴的線粒體嵴和膜部分或全部溶解消失的組織形態(tài)結構改變，且腎上腺結構改變較下丘腦與垂體變化明顯，以模型組為著。 結論： 本實驗探討了不同時間應用小劑量地塞米松對膿毒癥早期合并相對腎上腺皮質(zhì)功能不全大鼠血清皮質(zhì)醇、TNF-a和IL-6生成的影響，并通過觀察下丘腦、垂體、腎上腺的電鏡切片判斷HPAA

11、的功能不全是否伴隨結構改變，從而得出以下結論： 1 膿毒癥早期大鼠即存在相對腎上腺皮質(zhì)功能不全。 2 合并相對腎上腺皮質(zhì)功能不全的膿毒癥大鼠血清TNF-a、IL-6均明顯升高。 3 小劑量激素預防性應用能提高T<,0>水平，但對ACTH刺激試驗無明顯影響。 4 小劑量激素替代治療能有效降低血清TNF-a、IL-6水平，且早期應用效果更理想。 5 下丘腦、垂體、腎上腺在膿毒癥存在時均出現(xiàn)代謝性結構改