反義波形蛋白逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞中間絲蛋白表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte，Ast)劃傷模型，觀察反義波形蛋白(vimentin，Vim)cDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)培養(yǎng)損傷的Ast細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)曲線的作用，及其對(duì)中間絲Vim和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)表達(dá)的影響；建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，觀察大鼠脊髓損傷(spinalcordinjury,SCI)后運(yùn)動(dòng)功能及中間絲蛋白表達(dá)的變化，并初步探討反義Vi

2、mcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒、硫酸軟骨素酶ABC及二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠SCI后中間絲蛋白表達(dá)變化的影響，為進(jìn)一步深入研究反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒、硫酸軟骨素酶ABC及二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠SCI后膠質(zhì)瘢痕形成的作用，探討其對(duì)神經(jīng)再生的影響提供初步的研究基礎(chǔ)。 方法： 第一部分，利用大鼠乳鼠大腦皮層組織培養(yǎng)Ast細(xì)胞，建立體外培養(yǎng)Ast細(xì)胞劃傷模型，通過形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞計(jì)數(shù)等研究反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)損傷的Ast細(xì)胞的影響，

3、并通過細(xì)胞免疫熒光、RT-PCR、Westernblot等方法研究Vim和GFAP表達(dá)的變化。 第二部分，建立大鼠T10-T11脊髓半橫斷損傷模型，通過RT-PCR、Westernblot等方法研究Vim和GFAP表達(dá)的變化，并通過反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒及硫酸軟骨素酶ABC局部作用于受損脊髓組織，研究其對(duì)Vim和GFAP表達(dá)變化的影響。 結(jié)果： 1.反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染損傷的Ast細(xì)胞后，細(xì)胞突

4、起回縮，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線減緩，RT-PCR示VimmRNA表達(dá)減低，細(xì)胞免疫熒光及Westernblot結(jié)果提示Vim和GFAP蛋白水平表達(dá)下調(diào)。 2.大鼠脊髓半橫斷后，損傷側(cè)后肢完全癱瘓，損傷對(duì)側(cè)不完全癱瘓，2w時(shí)損傷側(cè)后肢無明顯變化，損傷對(duì)側(cè)運(yùn)動(dòng)功能明顯恢復(fù)；免疫組織化學(xué)染色提示損傷部位膠質(zhì)瘢痕形成，GFAP及Vim表達(dá)增加；RT-PCR示Vim基因表達(dá)明顯上調(diào)，Westernblot示GFAP和Vim均明顯表達(dá)。 3.

5、SCI大鼠損傷部位注射反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒后2w,VimmRNA表達(dá)受到抑制，Vim及GFAP表達(dá)下調(diào)；注射硫酸軟骨素酶ABC后，VimmRNA及Vim和GFAP的蛋白表達(dá)未受到明顯影響。 4.反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒及硫酸軟骨素酶ABC聯(lián)合作用于SCI大鼠后2w，VimmRNA表達(dá)受到抑制，Westernblot示Vim及GFAP表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論： 1.反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)損傷的