反義波形蛋白逆轉錄病毒對星形膠質細胞中間絲蛋白表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)的星形膠質細胞(astrocyte，Ast)劃傷模型，觀察反義波形蛋白(vimentin，Vim)cDNA逆轉錄病毒對培養(yǎng)損傷的Ast細胞細胞形態(tài)、生長曲線的作用，及其對中間絲Vim和膠質纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)表達的影響；建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，觀察大鼠脊髓損傷(spinalcordinjury,SCI)后運動功能及中間絲蛋白表達的變化，并初步探討反義Vi

2、mcDNA逆轉錄病毒、硫酸軟骨素酶ABC及二者聯(lián)合應用對大鼠SCI后中間絲蛋白表達變化的影響，為進一步深入研究反義VimcDNA逆轉錄病毒、硫酸軟骨素酶ABC及二者聯(lián)合應用對大鼠SCI后膠質瘢痕形成的作用，探討其對神經(jīng)再生的影響提供初步的研究基礎。 方法： 第一部分，利用大鼠乳鼠大腦皮層組織培養(yǎng)Ast細胞，建立體外培養(yǎng)Ast細胞劃傷模型，通過形態(tài)學觀察、細胞計數(shù)等研究反義VimcDNA逆轉錄病毒對損傷的Ast細胞的影響，

3、并通過細胞免疫熒光、RT-PCR、Westernblot等方法研究Vim和GFAP表達的變化。 第二部分，建立大鼠T10-T11脊髓半橫斷損傷模型，通過RT-PCR、Westernblot等方法研究Vim和GFAP表達的變化，并通過反義VimcDNA逆轉錄病毒及硫酸軟骨素酶ABC局部作用于受損脊髓組織，研究其對Vim和GFAP表達變化的影響。 結果： 1.反義VimcDNA逆轉錄病毒轉染損傷的Ast細胞后，細胞突

4、起回縮，細胞生長曲線減緩，RT-PCR示VimmRNA表達減低，細胞免疫熒光及Westernblot結果提示Vim和GFAP蛋白水平表達下調。 2.大鼠脊髓半橫斷后，損傷側后肢完全癱瘓，損傷對側不完全癱瘓，2w時損傷側后肢無明顯變化，損傷對側運動功能明顯恢復；免疫組織化學染色提示損傷部位膠質瘢痕形成，GFAP及Vim表達增加；RT-PCR示Vim基因表達明顯上調，Westernblot示GFAP和Vim均明顯表達。 3.

5、SCI大鼠損傷部位注射反義VimcDNA逆轉錄病毒后2w,VimmRNA表達受到抑制，Vim及GFAP表達下調；注射硫酸軟骨素酶ABC后，VimmRNA及Vim和GFAP的蛋白表達未受到明顯影響。 4.反義VimcDNA逆轉錄病毒及硫酸軟骨素酶ABC聯(lián)合作用于SCI大鼠后2w，VimmRNA表達受到抑制，Westernblot示Vim及GFAP表達下調。 結論： 1.反義VimcDNA逆轉錄病毒轉染體外培養(yǎng)損傷的