左乙拉西坦對(duì)多藥耐藥基因表達(dá)的影響及氟桂利嗪在小兒難治性癲癇中的應(yīng)用.pdf

1、研究背景: 癲癇是一種反復(fù)發(fā)作的、慢性腦部疾病。盡管近幾年來診斷和治療水平有了很大提高，但仍有1/4以上的患者不能控制發(fā)作，臨床上稱為難治性癲癇(RE)[1]。目前發(fā)現(xiàn)難治性癲癇的主要發(fā)病機(jī)制之一是多藥耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物P-gp蛋白在難治性癲癇腦組織中的過度表達(dá)。左乙拉西坦作為一種新型的抗癲癇藥物，對(duì)MDRl表達(dá)的影響目前尚不明了。利用海人酸制備的慢性癲癇模型是一種接近于人類顳葉癲癇的模型，而顳葉癲癇是一種較常見的難治性癲癇。

2、因此制備海人酸致癲模型來研究左乙拉西坦對(duì)MDR1的影響對(duì)指導(dǎo)臨床有重要意義。 氟桂利嗪是一種鈣離子拮抗劑，據(jù)報(bào)道在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中對(duì)多藥耐藥基因有逆轉(zhuǎn)作用，對(duì)難治性癲癇輔助治療有效，但目前還未在臨床中常規(guī)應(yīng)用。氟桂利嗪對(duì)難治性癲癇治療的作用機(jī)制尚不明了，而且能否在兒科中應(yīng)用及療效還需探討。因此，通過檢測(cè)難治性癲癇患兒外周血MDR1 mRNA的表達(dá)，以及對(duì)氟桂利嗪的反應(yīng)和耐受情況來觀察氟桂利嗪作為兒科輔助用藥的可能性具有重要意義。

3、 目的： 探討左乙拉西坦對(duì)多藥耐藥基因的影響；研究難治性癲癇患兒外周血中MDR1 mRNA的表達(dá)及氟桂利嗪作為輔助用藥在小兒難治性癲癇治療中的作用及耐受性。 方法： 1、左乙拉西坦對(duì)MDR1表達(dá)的影響：選用生后7d(P7)的Wistar大鼠70只，隨機(jī)分為癲癇觀察組38只和正常對(duì)照組32只。癲癇觀察組給予海人酸(kainic acid，KA)1mg/kg(0.5ml/kg)，腹腔注射致癇，對(duì)照組應(yīng)用相同方法給予

4、相同劑量的生理鹽水。待慢性癲癇模型建立后，癲癇觀察組隨機(jī)分為慢性癲癇(簡(jiǎn)稱EP)觀察組，13只，慢性癲癇治療(簡(jiǎn)稱EP+LEV)組，15只；正常對(duì)照組分為生理鹽水對(duì)照(control)組，16只和正常生理鹽水對(duì)照治療(control+LEV)組，16只。治療組給予左乙拉西坦(80mg/kg)灌胃，治療8w后，斷頭取海馬，稱重，一步法逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(PT-PCR)檢測(cè)mdr1a和mdr1b mRNA的表達(dá)。 2、應(yīng)用RT-P

5、CR半定量檢測(cè)86例受試者(難治性癲癇患兒64例，其中氟桂利嗪治療組36例，安慰劑組28例；正常對(duì)照組22例)外周血MDR1 mRNA的表達(dá)情況。輔助治療7～8w(氟桂利嗪治療組給予5mg，po，qn；安慰劑組給予維生素B610mg，po，qn)，進(jìn)行臨床療效觀察。發(fā)作減少≥50％為有效，用藥后復(fù)查MDR1 mRNA的表達(dá)。同時(shí)觀察患兒對(duì)藥物的反應(yīng)和耐受性。 結(jié)果： 1、注射海人酸后2～10min出現(xiàn)5-7級(jí)發(fā)作，平均潛

6、伏時(shí)間為(4.3±3.1)min，第2～3w起出現(xiàn)自發(fā)性反復(fù)驚厥(spontaneous recurrent seizure，SRS)，每日發(fā)作約4～5次。Wistar大鼠共死亡8只，造模失敗2只，致癇成功率為94.74％，模型成功率為73.69％。 2、慢性癲癇治療組在給予LEV治療2w起，自發(fā)性發(fā)作次數(shù)減少，每日減少至0～2次不等，但未完全緩解；正常對(duì)照組無癲癇發(fā)作。 3、海馬重量：癲癇觀察組腦重下降15.3％，(癲

7、癇觀察組0.137±0.018；正常對(duì)照組0.158±0.015，P<0.01)；慢性癲癇治療組與慢性癲癇組相比，升高8.1％(EP+LEV組0.149±0.013，EP組0.137±0.018，P<0.05)；生理鹽水對(duì)照治療組較生理鹽水對(duì)照組下降3.3％(control+LEV組0.153±0.017；control組0.158±0.015，P>0.05)。 慢性癲癇觀察組和慢性癲癇觀察治療組mdr1a和mdr1b mRNA

8、表達(dá)明顯增高于生理鹽水對(duì)照組和生理鹽水對(duì)照治療組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；慢性癲癇觀察組mdr1a和mdr1b mRNA表達(dá)高于慢性癲癇觀察治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；生理鹽水對(duì)照治療組與生理鹽水對(duì)照組相比，mdr1a和mdr1b mRNA表達(dá)有降低的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4、臨床療效觀察：添加治療7～8w后，安慰劑組28例，2例發(fā)作減輕，占7.14％；氟桂利嗪治療組36例，治療有效

9、20例(55.56％)，表現(xiàn)為發(fā)作次數(shù)明顯減少，發(fā)作持續(xù)時(shí)間較前減短，發(fā)作的嚴(yán)重程度減輕，多次腦電圖檢測(cè)顯示癲癇樣放電明顯減少，與安慰劑組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。 添加治療前，難治性癲癇組(64例)外周血MDR1 mRNA的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(22例)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 添加治療后，氟桂利嗪治療組(36例)MDR1 mRNA的表達(dá)低于安慰劑組(28例)，但高于正常對(duì)照組，

10、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，安慰劑組MDR1 mRNA的表達(dá)比正常對(duì)照組高1.14倍，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 安慰劑組MDR1 mRNA的表達(dá)高于添加治療前難治性癲癇組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，氟桂利嗪治療組MDR1 mRNA的表達(dá)低于添加治療前難治性癲癇組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 應(yīng)用氟桂利嗪治療的患兒2例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)頭暈，不良反應(yīng)發(fā)生率為8.33％。

11、 結(jié)論： 1、反復(fù)癲癇發(fā)作可使Wistar大鼠海馬中mdr1a和mdr1b mRNA表達(dá)增高。 2、抗癲癇新藥左乙拉西坦可使大鼠海馬多藥耐藥基因的表達(dá)減少。 3、左乙拉西坦可使癲癇大鼠海馬的重量增加，但使正常大鼠海馬重量減輕。 4、難治性癲癇患兒MDR1 mRNA在外周血和腦組織同步表達(dá)，因此，檢測(cè)外周血MDR1 mRNA的表達(dá)對(duì)于臨床診治有重要指導(dǎo)意義。 5、氟桂利嗪對(duì)MDR1 mRNA的表