Ⅰ型人類免疫缺陷病毒蛋白R（HIV-1Vpr）對膠質(zhì)瘤作用的體外研究.pdf

1、目的：探討Ⅰ型人類免疫缺陷病毒蛋白R(HIV-1Vpr)對人U251和大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和凋亡的影響。 方法：1.構(gòu)建并鑒定含有HIV-1Vpr基因的真核表達(dá)載體pUB6/Vpr。2.采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將pUB6/Vpr轉(zhuǎn)染至膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251和C6中，RT-PCR檢測Vpr的mRNA在兩種細(xì)胞中的表達(dá)。測定MTT光密度值以觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖活性的變化，細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算細(xì)胞生長抑制率，流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的凋亡狀態(tài)和

2、細(xì)胞周期的改變。 結(jié)果： 1.成功構(gòu)建HIV-1Vpr基因的真核表達(dá)載體pUB6/Vpr。 2.利用脂質(zhì)體介導(dǎo)pUB6/Vpr轉(zhuǎn)染至膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251和C6中，24小時(shí)后提取細(xì)胞的RNA進(jìn)行RT-PCR，可檢測到在兩種細(xì)胞中均有VprmRNA的表達(dá)。 3.pUB6/Vpr轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251和C6后，可引起：①轉(zhuǎn)染后的U251和C6細(xì)胞增殖能力受到抑制，MTT吸收值在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、48小時(shí)和72小

3、時(shí)均下降，與不含HIV-1Vpr基因的空載體pUB6/V5-HisA組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②U251和C6細(xì)胞的增殖能力有所下降，U251細(xì)胞在pUB6/Vpr轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的生長抑制率為18.5％，C6細(xì)胞在pUB6/Vpr轉(zhuǎn)染后36小時(shí)的生長抑制率為39.7％。③轉(zhuǎn)染pUB6/Vpr后72小時(shí)，U251細(xì)胞處于G2/M期的細(xì)胞數(shù)高于pUB6/V5-HisA對照組。④光鏡下發(fā)現(xiàn)pUB6/Vpr轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞一定時(shí)間后細(xì)胞出現(xiàn)凋亡表現(xiàn)