HIV-1Vpr激光細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路分子機(jī)制的研究.pdf

1、Vpr是由人類免疫缺陷病毒(Ⅰ)型(HIV-1)編碼的輔助蛋白。Vpr蛋白在病毒感染晚期表達(dá)，通過與Gag p6直接相互作用被包裝到病毒顆粒中。Vpr在HIV-1復(fù)制及致病性等方面發(fā)揮重要作用，特別是能夠在病毒感染早期改變細(xì)胞環(huán)境，使之有利于病毒復(fù)制。vpr基因的缺失會(huì)導(dǎo)致病毒復(fù)制能力顯著下降。Vpr具有多種功能，包括可調(diào)節(jié)細(xì)胞NF-κB在內(nèi)的多條信號(hào)通路，但Vpr對(duì)NF-κB信號(hào)通路的確切作用及其中的分子機(jī)制尚不明確。本文對(duì)Vpr與N

2、F-κB信號(hào)通路的關(guān)系展開研究，獲得相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下:
　　1.證實(shí)Vpr可同時(shí)激活NF-κB經(jīng)典和非經(jīng)典信號(hào)通路:發(fā)現(xiàn)在HIV-1感染早期，病毒顆粒包裝的Vpr能增強(qiáng)IκBα的磷酸化;同時(shí)，Vpr可以促進(jìn)p65磷酸化及入核并最終激活NF-κB報(bào)告基因;過表達(dá)Vpr及病毒顆粒攜帶的Vpr均能引起p100的磷酸化，促進(jìn)p100剪切為p52，從而活化非經(jīng)典通路。
　　2.Vpr與NF-κB經(jīng)典和非經(jīng)典信號(hào)通路上游的IKKα和IK

3、Kβ存在相互作用，并調(diào)節(jié)二者的磷酸化;利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)細(xì)胞內(nèi)源p65、RelB、IKKα及IKKβ的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Vpr對(duì)NF-κB信號(hào)通路的激活作用明顯減弱。
　　3.通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)對(duì)IKK復(fù)合物上游關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子的篩選，發(fā)現(xiàn)Vpr與TRAF6及TAK1在體內(nèi)存在相互作用，不與TRAF2及TAB1相互作用。但Vpr并不能影響TRAF6的自身泛素化。過表達(dá)和病毒感染兩個(gè)層面均證實(shí)Vpr可在多種細(xì)胞中增強(qiáng)TAK1第187位蘇氨酸

4、(Thr187)的磷酸化，導(dǎo)致底物蛋白IKKα、IKKβ及MKK7的磷酸化，進(jìn)而活化下游信號(hào)通路;同時(shí)，Vpr對(duì)TAK1的磷酸化依賴于TAB1及TRAF6;此外，Vpr通過募集TAB3促進(jìn)TAK1的泛素化。
　　4.對(duì)Vpr活化NF-κB信號(hào)通路后對(duì)自身功能的影響進(jìn)行初探:在NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白下調(diào)的細(xì)胞系中，檢測Vpr對(duì)HIV-1 LTR的激活作用，結(jié)果表明，Vpr介導(dǎo)的NF-KB活化促進(jìn)了其對(duì)LTR的激活作用;進(jìn)一步通過

5、流式細(xì)胞術(shù)分析了Vpr在這些細(xì)胞系中誘導(dǎo)細(xì)胞周期G2/M期停滯的能力，初步證明NF-κB信號(hào)通路的激活有助于Vpr行使細(xì)胞周期停滯功能。
　　綜上所述，本文證實(shí)了HIV-1感染宿主細(xì)胞早期，Vpr能夠激活細(xì)胞內(nèi)NF-κB經(jīng)典和非經(jīng)典信號(hào)通路，并初步闡明其中的分子機(jī)制:Vpr一方面通過增強(qiáng)IKKα及IKKβ的磷酸化，另一方面通過結(jié)合并增強(qiáng)TAK1的活性，共同實(shí)現(xiàn)了“劫持”NF-κB信號(hào)通路的目的，并促進(jìn)自身LTR的轉(zhuǎn)錄、引起細(xì)胞周期