迷走神經(jīng)刺激后處理對大鼠在體心肌缺血-再灌注損傷的保護作用及機制的實驗研究.pdf

1、背景：
　　 研究表明，在急性心肌缺血恢復(fù)血流灌注后，由缺血-再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)所致的心肌梗死后死亡率仍然高達10％。動物實驗亦發(fā)現(xiàn)，心肌缺血時高達50%的最終心肌梗死面積是歸因于IRI。目前，已經(jīng)公認缺血預(yù)處理是最為強大的內(nèi)源性心肌保護干預(yù)措施。然而，由于心肌缺血事件的不可預(yù)測性，所以在臨床實踐中很難對其采取預(yù)先干預(yù)措施。因此，除了能夠在實施心臟手術(shù)的患者選擇性應(yīng)用之外

2、，缺血預(yù)處理的臨床應(yīng)用價值十分有限。缺血后處理則解決了臨床干預(yù)時機選擇的問題，而且其也已被證明具有確切的心肌保護作用。但是，諸如反復(fù)阻塞冠狀動脈這樣的操作有導(dǎo)致病變冠狀動脈破裂或粥樣斑塊脫落等并發(fā)癥的高度風(fēng)險，故其臨床應(yīng)用價值也十分有限。相比之下，肢體遠隔缺血后處理則能夠避免在心臟直接進行操作，而且大量研究表明其對心肌IRI具有明確的保護作用。此外，肢體遠隔缺血后處理還具有安全、實施簡單和費用低廉等優(yōu)點。因此，肢體遠隔缺血后處理不失為臨

3、床治療心肌IRI的一種較佳選擇。
　　 現(xiàn)已明確，炎癥反應(yīng)在心肌IRI的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著極為重要的致病作用，并且調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)可以減輕心肌IRI。晚近研究發(fā)現(xiàn)，迷走神經(jīng)同樣具有免疫炎癥調(diào)節(jié)功能，其激活后能夠通過膽堿能抗炎通路(cholinergic anti-inflammatory pathway)而實現(xiàn)對炎癥反應(yīng)的調(diào)控。在內(nèi)毒素血癥、結(jié)腸炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和IRI等炎癥性疾病時，迷走神經(jīng)刺激能夠通過抑制炎癥細胞募集和炎癥細

4、胞因子釋放而調(diào)控炎癥反應(yīng)，進而發(fā)揮其保護作用。雖然已經(jīng)證實迷走神經(jīng)刺激能夠減小IRI所致的心肌梗死面積，但是目前尚無研究系統(tǒng)觀察迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌缺血-再灌注損傷時心肌局部與全身炎癥反應(yīng)的影響。
　　 聯(lián)合應(yīng)用不同的干預(yù)措施以獲得有益的強效心肌保護效果一直是心肌IRI保護研究領(lǐng)域的重要方向，而且迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理是兩種作用機制明顯不同的心肌保護干預(yù)措施。因此，我們設(shè)計了這個隨機對照實驗，主要目的包括：<

5、br>　　 ①觀察迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌IRI保護的有效性、可用性和最佳干預(yù)時間；
　　 ②評價將迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理這兩種極具臨床應(yīng)用前景的簡單干預(yù)措施聯(lián)合應(yīng)用能否獲得有益的協(xié)同性心肌保護作用；
　　 ③觀察PI3K/Akt和JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在迷走神經(jīng)刺激后處理、肢體遠隔缺血后處理、聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理心肌保護作用中的地位，以探索不同心肌保護干預(yù)措施的內(nèi)在作用

6、機制。
　　 本實驗分為三個部分：
　　 第1部分：迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌缺血-再灌注損傷的保護作用及其最佳干預(yù)時間的研究
　　 第1部分實驗的目的是采用大鼠在體心肌IRI模型比較性觀察在不同時間點應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌IRI及其炎癥反應(yīng)的影響，以確定迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護作用及其最佳干預(yù)時間。
　　 將140只體重290～320g的成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠麻醉后隨機

7、平均分為七組（每組20只）：空白對照組(S組)；對照組（C組）；缺血預(yù)處理組（IPC組）；心肌缺血15min迷走神經(jīng)刺激后處理組（POESI15組）；再灌注前迷走神經(jīng)刺激后處理組（POESR0組）；再灌注30min迷走神經(jīng)刺激后處理組處理組(POESR30組)；再灌注60min迷走神經(jīng)刺激后處理組（POESR60組）。所有大鼠開胸后采用絲線將其冠狀動脈左前降支（left anterior descending coronary arte

8、ry，LAD）套扎做成活結(jié)。除S組之外，所用大鼠均接受局部心肌缺血30min(阻斷LAD)和再灌注120min（開放LAD）的處理。C組不采用任何其他干預(yù)措施；IPC組在結(jié)扎LAD前進行3個循環(huán)的缺血預(yù)處理，每個循環(huán)是由5min的LAD阻斷和5min的LAD開放組成，總處理時間是30min;POESI15、POESR0、POESR30和POESR60組是分別在心肌缺血15min時、心肌再灌注前即刻、心肌再灌注30min時和心肌再灌注60

9、min時對大鼠的右側(cè)迷走神經(jīng)進行電刺激，持續(xù)時間為30min。實驗過程中，連續(xù)監(jiān)測心率(heartrate，HR)、平均動脈壓(mean arterial pressure，MAP)和Ⅱ?qū)?lián)心電圖（electrocardiogram，ECG），并保持大鼠直腸溫度在36.5～37.5℃之間。然后，將每組大鼠進一步隨機平均分為2個亞組（每亞組10只），第1亞組在再灌注30min、60min和120min時抽取血液標本，采用大鼠專用試劑盒分別

10、測定血清心肌肌鈣蛋白I（cardiac troponin-I，cTnI）、肌酸激酶心肌型同工酶(myocardial-bound creatine kinase，CK-MB)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、高遷移率組蛋白1（high mobility group box 1 protein，HMGB1）、細胞間粘附分子1（intercellular adhesion molecule 1

11、，ICAM1）、白介素-1(interleukin-1，IL-1)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)和白介素-10(interleukin-10，IL-10)的濃度；在實驗結(jié)束時，采用伊文思藍和氯化三苯基四氮唑雙重染色技術(shù)檢測心肌梗死面積(infarct size，IS%)。在實驗結(jié)束時，第2亞組用于檢測缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、ICAM1、IL-1、IL-6和IL-10的含量。
　

12、　 結(jié)果：顯示，各組大鼠的一般情況和心肌缺血前血流動力學(xué)參數(shù)的基礎(chǔ)值比較差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 與S組、C組或IPC組相比，POESI15組的HR在缺血期和再灌注期間均明顯降低，POESRO組、POESR30組和POESR60組的HR在再灌注期間明顯降低。與S組相比，C組、IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組在缺血期和再灌注期的MAP和心率血壓乘積（rate-pressure p

13、roduct，RPP）均明顯降低。與IPC組相比，C組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血期發(fā)生室性心律失常的大鼠數(shù)目明顯增多，而且缺血期室性心律失常評分亦明顯增高。與C組相比，IPC組、POESI15組和POESR0組再灌注初期發(fā)生室性心動過速(ventricular tachycardia，VT)的大鼠數(shù)目明顯減少，而且再灌注初期室性心律失常評分亦明顯降低。
　　 與C組相比，IPC組、

14、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度均明顯降低；與IPC組相比，POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組的IS%值均明顯增高；與POESI15組相比，POESR60組的IS%值、血清cTnI、CK-MB濃度明顯增高，POESR0組和POESR30組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度無顯著統(tǒng)計學(xué)差異；與POESR0組相比，POESR6

15、0組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度明顯增高，POESR30組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度無顯著統(tǒng)計學(xué)差異；與POESR30組相比，POESR60組的IS%值、血清CK-MB濃度無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 與S組相比，C組再灌注30min、60min和120min時血清TNF-α濃度明顯增高；C組、IPC組和POESI15組再灌注60min時血清HMGB1濃度，C組、POESR0組、POESR30組和POESR

16、60組再灌注120min時血清HMGB1濃度明顯增高；C組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時血清ICAM1濃度明顯增高；C組、IPC組、POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時血清IL-1的濃度明顯增高；C組、IPC組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時血清IL-6濃度明顯增高；POESI15組再灌注120min時血清IL-10濃度

17、明顯增高。與C組相比，IPC組和POESI15組再灌注30min和60min時血清TNF-α濃度明顯降低；IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時血清TNF-α、HMGB1、ICAM1、IL-1、IL-6濃度明顯降低。與IPC組相比，POESI15組再灌注60min時血清TNF-α濃度明顯增高；POESR60組再灌注120min時血清TNF-α濃度明顯增高；POESR0組、POE

18、SR30組和POESR60組再灌注120min時血清HMGB1和ICAM1濃度明顯增高；POESI15組再灌注120min時血清IL-1的濃度明顯降低；POESI15組和POESR0組再灌注120min時血清IL-6濃度明顯降低。與POESI15組相比，POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時血清HMGB1和ICAM1的濃度明顯增高；POESR60組再灌注120min時血清IL-1、IL-6和TNF-α的濃

19、度明顯增高。與POESR0組相比，POESR60組再灌注120min時血清HMGB1、IL-6和TNF-α的濃度明顯增高；POESR30組和POESR60組再灌注120min時血清ICAM1濃度明顯增高。與POESR30組相比，POESR60組再灌注120min時血清HMGB1、ICAM1和TNF-α濃度明顯增高。
　　 與S組相比，C組缺血區(qū)心肌組織TNF-α和HMGB1含量明顯增高，IPC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯降

20、低；C組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯增高；C組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯增高，IPC組、POESI15組、POESR0組和POESR30組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低；C組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織ICAM1、IL-1和IL-6含量明顯增高；C組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1和IL-6含量明顯增高，IPC組、POESI15組

21、和POESR0組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量明顯降低；C組、IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織IL-1含量、缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；IPC組和POESI15組非缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯降低。與C組相比，IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、IL

22、-1和IL-6含量明顯降低；POESI15組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高。與IPC組相比，POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯增高；POESI15組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低，POESR60組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯增高；POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量明顯增高；

23、POESR30組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1、缺血區(qū)IL-6含量明顯增高；POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-1、非缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯增高。與POESI15組相比，POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量、非缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量、缺血區(qū)心肌組織IL-1含量明顯增高；POESR60組缺血區(qū)心肌組織HMGB1、IL

24、-6含量明顯增高，缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯降低；POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量、非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、IL-1和IL-6含量明顯增高。與POESR0組相比，POESR60組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、IL-1、IL-6含量、非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、IL-1和IL-6含量明顯增高；POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織

25、ICAM1含量明顯增高。與POESR30組相比，POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織ICAM1和IL-6含量以及非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量均明顯增高。
　　 第2部分：聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理對心肌缺血-再灌注損傷保護作用的研究
　　 根據(jù)第1部分實驗的結(jié)果，在確定迷走神經(jīng)刺激后處理最佳干預(yù)時間的基礎(chǔ)上，我們設(shè)計了這部分實驗，其目的是評價聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理

26、能否獲得增強的心肌保護作用。
　　 將120只體重290～320g的成年雄性SD大鼠麻醉后隨機平均分為六組（每組20只）：空白對照組(S組)；對照組（C組）；缺血預(yù)處理組(IPC組)；迷走神經(jīng)刺激后處理組（POES組）；肢體遠隔缺血后處理組(LRIPOC組)；聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理組（POES-LRIPOC組）。C組和IPC組的處理同第1部分實驗；POES組是根據(jù)第1部分實驗獲得的結(jié)果在最佳時間點進行迷走

27、神經(jīng)刺激；LRIPOC組的基本處理與C組相同，在心肌缺血20min時采用止血帶結(jié)扎大鼠雙側(cè)后肢造成雙后肢缺血10min，并在開放LAD實施心肌血流再灌注的同時開放后肢血流灌注；POES-LRIPOC組的基本處理與C組相同，迷走神經(jīng)刺激后處理的實施方法同POES組，肢體遠隔缺血后處理的實施方法同LRIPOC組。然后，將每組大鼠進一步隨機平均分為2個亞組（每亞組10只），各組檢測項目與第1部分實驗相同。
　　 結(jié)果：顯示，各組大鼠的

28、一般情況和心肌缺血前血流動力學(xué)參數(shù)的基礎(chǔ)值比較差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 與S組、C組或IPC組相比，POES組和POES-LRIPOC組的HR在缺血期和再灌注期明顯降低。與S組相比，C組、IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組的MAP和RPP在缺血期和再灌注期均明顯降低。與IPC組相比，C組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組缺血期室性心律失常發(fā)生率和室性心律失常評分明顯增高。與C組

29、相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注期室性心律失常發(fā)生率和室性心律失常評分均明顯降低；與LRIPOC組相比，IPC組、POES組和POES-LRIPOC組再灌注期間室性心律失常發(fā)生率和室性心律失常評分明顯降低。
　　 與C組相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度均明顯降低；與IPC組或POES-LRIPOC組相比，POES

30、組和LRIPOC組的IS%值明顯增高；與POES組相比，LRIPOC組的IS%值和血清cTnI濃度明顯增高，LRIPOC組的血清CK-MB濃度明顯降低。與LRIPOC組相比，IPC組和POES-LRIPOC組的血清cTnI和CK-MB濃度均明顯降低。
　　 與S組相比，C組和LRIPOC組再灌注30min時血清TNF-α濃度明顯增高；C組再灌注60min和120min時血清TNF-α濃度明顯增高，IPC組和POES-LRIPOC

31、組再灌注60min時血清TNF-α濃度明顯降低；IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注120min時血清TNF-α濃度明顯降低；C組、IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注60min時血清HMGB1濃度明顯增高；C組和LRIPOC組再灌注120min時血清HMGB1濃度明顯增高；C組、POES組和LRIPOC組再灌注120min時血清ICAM1濃度明顯增高；C組、IPC組和LR

32、IPOC組再灌注120min時血清IL-1和IL-6濃度明顯增高；POES組和POES-LRIPOC組再灌注120min時血清IL-10濃度明顯增高。與C組相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注30min、60min和120min時血清TNF-α濃度、再灌注120min時血清HMGB1、ICAM1、IL-1、IL-6濃度明顯降低：IPC組再灌注60min時血清HMGB1濃度明顯降低；POES-LRIP

33、OC組再灌注120min時血清IL-10濃度明顯增高。與IPC組相比，POES組和LRIPOC組再灌注60min時血清TNF-α濃度明顯增高；LRIPOC組再灌注120min時血清HMGB1和ICAM1濃度明顯增高；POES組和POES-LRIPOC組再灌注120min時血清IL-1和IL-6濃度明顯降低。與POES組相比，LRIPOC組再灌注60min時血清TNF-α濃度、再灌注120min時血清HMGB1、ICAM1、IL-1和IL

34、-6濃度明顯增高；POES-LRIPOC組再灌注120min時血清ICAM1濃度明顯降低。與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組再灌注30min、60min和120min時血清TNF-α濃度、再灌注120min時血清HMGB1、ICAM1、IL-1和IL-6濃度均明顯降低。
　　 與S組相比，C組缺血區(qū)心肌組織TNF-α和HMGB1含量以及非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1和ICAM1含量明顯增高；IPC組和POES

35、-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯降低；IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低；C組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量明顯增高；IPC組、POES組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1和IL-6含量明顯降低；C組、POES組和LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織IL-1和IL-6含量明顯增高；C組、IPC組

36、、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織IL-1、IL-10含量、缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；C組和LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯增高。與C組相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、ICAM1、IL-1和IL-6含量均明顯降低；POES組和POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL

37、-10含量明顯增高。與IPC組相比，POES組和LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、ICAM1和IL-1含量明顯增高；POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低，缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；POES組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低；LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1、IL-1和IL-6含量，缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯增高。與POES組相比，PO

38、ES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、ICAM1和IL-1含量明顯降低，非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、ICAM1、IL-1和IL-6含量以及缺血區(qū)心肌組織ICAM1、IL-1和IL-6含量明顯增高，缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯降低。與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、ICAM1、IL-1和IL-6含量以及非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、ICA

39、M1、IL-1和IL-6含量明顯降低，缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高。
　　 第3部分:PI3K/Akt和JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在迷走神經(jīng)刺激后處理以及聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理心肌保護作用機制中地位的研究
　　 本部分實驗的目的是探討PI3K/Akt和JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在單獨應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理以及聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理心肌保護作用機

40、制中的地位。
　　 將20只體重290～320g的成年雄性SD大鼠麻醉后隨機平均分為四組（每組5只）：對照組(C組)；迷走神經(jīng)刺激后處理組(POES組)；肢體遠隔缺血后處理組（LRIPOC組）；聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理組（POES-LRIPOC組）。各組的處理基本同本實驗第二部分，但是在開放LAD實施再灌注60min時結(jié)束實驗，分別取大鼠左心室缺血區(qū)心肌標本和右心室非缺血區(qū)心肌標本。從缺血與非缺血區(qū)心肌標本

41、中提取總蛋白和總RNA，采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain reaction，RQ-PCR)技術(shù)觀察Akt和STAT3基因mRNA在缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織的表達情況，并通過免疫蛋白印跡分析(Western-blotting)技術(shù)觀察缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt和STAT3蛋白磷酸化的情況。
　　 RQ-PCR結(jié)果顯示，與C組相比，POES-

42、LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt基因和STAT3基因mRNA表達均明顯增強；與POES組相比，POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt基因和STAT3基因mRNA表達明顯增強；與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt基因和STAT3基因mRNA表達明顯增強。
　　 Western-blotting結(jié)果顯示，與C組相比，POES組、LRIPOC組

43、和POES-LRIPOC組的缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織p-Akt蛋白和p-STAT3蛋白的灰度值明顯增加；與POES組相比，POES-LRIPOC組的缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織p-Akt蛋白和p-STAT3蛋白的灰度值明顯增加；與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組的缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織p-Akt蛋白和p-STAT3蛋白的灰度值明顯增加。
　　 結(jié)論：
　　 通過本實驗，我們得出以下結(jié)論：

44、
　　 1．心肌缺血15min時、再灌注前即刻、再灌注30min和再灌注60min時實施迷走神經(jīng)刺激后處理均能夠明顯減小IRI所致的心肌梗死面積，并明顯降低血清cTnI和CK-MB濃度，其中以在再灌注60min實施迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護效果最差，以在心肌缺血15min時實施迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護效果最強，但是迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護作用弱于缺血預(yù)處理。
　　 2．缺血預(yù)處理、缺血期和再灌注期不同時間點進行

45、迷走神經(jīng)刺激后處理均能明顯抑制再灌注期室性心律失常的發(fā)生；缺血15min時實施迷走神經(jīng)刺激后處理抑制再灌注期心律失常的作用較其他時間點進行迷走神經(jīng)刺激后處理更強。
　　 3．聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理能夠獲得更強的心肌保護作用，并且該心肌保護作用與缺血預(yù)處理的心肌保護作用幾無差異。
　　 4．缺血預(yù)處理、缺血期和再灌注期不同時間點進行迷走神經(jīng)刺激后處理、肢體遠隔缺血后處理、聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和

46、肢體遠隔缺血后處理均能通過抑制心肌IRI過程中的炎癥反應(yīng)而發(fā)揮心肌保護作用。
　　 5．PI3K/Akt和JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因在轉(zhuǎn)錄后蛋白磷酸化水平的上調(diào)參與了迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理的心肌保護作用；而PI3K/Akt和JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因mRNA水平的上調(diào)則參與了聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理的心肌保護。同時，聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠隔缺血后處理的心肌保護