不同灌注條件下兔尸體肺組織中NOS的表達變化.pdf

1、肺移植作為一種治療多種終末期肺部疾患的有效手段，對于終末期的肺氣腫、肺纖維化和肺動脈高壓具有根治作用。 但近十年，肺移植的發(fā)展較為緩慢，接受治療的患者數(shù)量并沒有明顯的增加，肺移植至今仍不能廣泛開展，其影響因素有多種，除了技術(shù)、觀念等因素以外，供肺的匱乏是非常重要的一點，它使得肺移植受到明顯的限制，不少患者因為等待供肺而延誤了病情，甚至在等待供肺的過程中死去。 在供肺嚴重匱乏的情況下，尸體肺就有可能成為解決此問題的一個非常

2、重要的手段。這方面還有諸多懸而未決的問題，其中如何更好的保護尸體供肺的生理功能是應用尸體肺的一個核心問題?，F(xiàn)在已知的保護手段有很多種，如再灌注、降溫、PGE1應用等等，初步證明均有一定的作用。 隨著時間的推移，在尸體肺內(nèi)有很多細胞因子和酶，如腫瘤壞死因子(TNF)、白介素(IL21、IL28)等會對其生理功能產(chǎn)生影響。但目前人們還不明了尸體肺內(nèi)一氧化氮合酶NOS的表達對供肺生理功能的影響。特別是尸體供肺中內(nèi)皮源型一氧化氮合酶eN

3、OS、誘生型一氧化氮合酶iNOS在不同時間點表達變化的規(guī)律及其影響因素還不清楚。 為此，本實驗首先建立了家兔尸體肺灌注模型。選用健康日本大耳白兔90只(河南省實驗動物中心提供)，雌雄不拘，體重1.8～2.2kg。隨機分為6組，每組15只,正常組(A組).單純給藥組(B組).LPD液灌注組(C組).EC液灌注組(D組).給藥后LPD液灌注組(E組).給藥后EC液灌注組(F組)。家兔直接處死后，分別應用PGE121μg/kg，LPD

4、液、EC液灌注，以及給藥后再灌注等方法對其進行處理。采用免疫組織化學SABC法、RT-PCR、灌注微循環(huán)阻力測量等方法，檢測不同影響因素下不同時間點尸體兔肺組織iNOS、eNOS在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平上的表達變化以及微循環(huán)血管的舒縮變化。從而進一步明確不同時間點NOS的變化與尸體肺內(nèi)微循環(huán)阻力的關(guān)系，以及對尸體肺生理功能的影響，為更好的保護尸體供肺提供實驗基礎。 結(jié)果1.eNOS在肺組織內(nèi)皮細胞的表達A、B組分別較C、D、E、F組灰度

5、值增幅明顯，eNOS減少最為明顯，差異顯著(P＜0.01)；C、D組分別較E、F組灰度值有不同程度升高，差異顯著(P＜0.01)；E、F組自身灰度值隨時間變化亦有輕度升高，eNOS的量相對穩(wěn)定。 2.2.iNOS在肺組織肺泡上皮細胞、平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞的表達A、B組分別較C、D、E、F組灰度值降幅明顯，iNOS增加最為明顯，差異顯著(P＜0.01)；C、D組分別較E、F組灰度值有不同程度降低，差異顯著(P＜0.01)；E、F組

6、自身灰度值隨時間變化亦有輕度降低，iNOS的量增幅不明顯。 3.eNOS、iNOSmRNA的表達變化eNOSmRNA的表達于各受試組均有不同程度減弱，iNOSmRNA的表達各受試組均有不同程度增強，其變化趨勢、幅度與上述免疫組化結(jié)果一致。 4.各組不同時間點壓力值的變化到第30分鐘時各組壓力值均有不同程度升高，A、B組分別較C、D、E、F組壓力值升幅明顯，差異顯著(P＜0.01)；C、D組分別較E、F組壓力值有不同程度升

7、高，差異顯著(P＜0.01)；E、F組自身壓力值相對穩(wěn)定。自30min±10min以后各組壓力值均有不同程度降低，A、B組分別較C、D、E、F組壓力值降幅明顯，差異顯著(P＜0.01)；C、D組分別較E、F組壓力值有不同程度降低，差異顯著(P＜0.01)；E、F組自身壓力值隨時間變化亦有輕度降低。 5.各組NOS的表達變化與微循環(huán)阻力的關(guān)系由免疫組化，RT-PCR結(jié)果可知，NOS的表達早期隨著eNOS的減少在減弱，而一段時間以后

8、，其表達隨著iNOS的增加在增強，NOS表達變化的直接結(jié)果就是NO的量隨之而變化，導致微循環(huán)血管的舒縮變化，影響微循環(huán)阻力。而壓力值的變化恰恰驗證了這一點，早期壓力值升高，表明微血管收縮，微循環(huán)阻力增加，一段時間后壓力值降低，微循環(huán)阻力降低。這些微循環(huán)的變化趨勢與NOS的表達變化、NO量的變化趨勢是一致的。 結(jié)論1.隨著時間的推移，尸體肺內(nèi)eNOS的量在減少，而iNOS的量在一定時間段內(nèi)在增加。通過積極的處理(再灌注、降溫、PG