實(shí)時(shí)超聲造影評(píng)價(jià)不同條件下孕鼠胎盤血流灌注的研究.pdf

1、背景:
　　 隨著超聲造影技術(shù)的更新和新型造影劑的出現(xiàn),已能有效的觀察實(shí)質(zhì)性臟器的微循環(huán)和血流灌注情況。近年的實(shí)驗(yàn)研究表明,對(duì)比脈沖超聲造影技術(shù)為產(chǎn)科胎盤的某些疾病提供了較彩色多普勒及能量多普勒超聲更為豐富的臨床信息,這對(duì)胎盤疾病的診斷提供了很大的幫助?？紤]造影研究是否會(huì)影響母體與胎兒的安全性以及倫理方面等多重因素,研究對(duì)象主要以動(dòng)物模型為主。
　　 胎盤內(nèi)存在母體和子體兩套血液循環(huán)通路,而胎盤屏障使得兩套循環(huán)并不溝通。

2、超聲造影劑的微泡大小與紅細(xì)胞相似,在正常情況下不能通過胎盤屏障。有學(xué)者將造影劑用于妊娠獼猴實(shí)驗(yàn)胎盤研究,注射聲學(xué)造影劑后進(jìn)行胎盤循環(huán)及子宮動(dòng)脈、胎猴臍動(dòng)脈和大腦中動(dòng)脈的觀察,造影劑使胎盤母體面血管顯示增強(qiáng),而對(duì)胎猴循環(huán)無明顯影響。本組前期實(shí)驗(yàn)將60只孕鼠進(jìn)行超聲輻照聯(lián)合造影劑按MI=0.13,1.0,1.4及連續(xù)輻照(5min)和間歇輻照(5min),孕鼠胎盤屏障通透性均未發(fā)生明顯改變。這更利于胎盤母體循環(huán)血流灌注的研究。
　　

3、 近年來,國(guó)內(nèi)外對(duì)胎盤血流灌注的研究均有報(bào)道。有學(xué)者在動(dòng)物胎盤離體情況下,應(yīng)用組織學(xué)與立體學(xué)方法得到胎盤母體、子體的血流灌注；也有學(xué)者應(yīng)用超聲生物顯微鏡的彩色多普勒方法,分析活體小動(dòng)物胎盤母體循環(huán)的血流流速；有學(xué)者也應(yīng)用超聲造影技術(shù)對(duì)晚孕大鼠胎盤進(jìn)行了造影劑灌注分析。這只是對(duì)正常胎盤血流流速及灌注的研究,而在病理狀態(tài)下,尚未見對(duì)胎盤血流灌注減少或增加時(shí)進(jìn)行系統(tǒng)分析的報(bào)告。同時(shí),也未深入到不同妊娠階段的動(dòng)物胎盤母體血流灌注以及胎盤不同區(qū)帶

4、的母體血流灌注做進(jìn)一步探討。
　　 研究目的:
　　 1.應(yīng)用CPS技術(shù)定量研究造影劑在不同妊娠階段大鼠胎盤的灌注參數(shù),分析胎盤造影劑灌注參數(shù)與胎盤血管床變化的關(guān)系。
　　 2.應(yīng)用CPS造影定量研究中、晚孕大鼠胎盤不同組織區(qū)帶的造影劑灌注參數(shù),分析胎盤不同區(qū)帶的血流灌注情況。
　　 3.CPS造影技術(shù)測(cè)定去甲腎上腺素與山莨菪堿的孕鼠胎盤血流灌注時(shí)的參數(shù),分析血管活性藥物作用后的胎盤血流灌注變化。

5、　　 方法:
　　 1.60只健康SD孕鼠按實(shí)驗(yàn)要求分3組:孕15d、孕17d、孕20d,每組20只。應(yīng)用超聲造影連續(xù)脈沖對(duì)比(contrast pulse sequencing,CPS)技術(shù),機(jī)械指數(shù)(Mechanicalindex,MI)0.2,經(jīng)鼠尾靜脈快速團(tuán)注SonoVue造影劑(1.0ml/kg),利用灌注定量分析軟件(AxiusTM.Auto Tracking Contrast Quantification,ACQ

6、)分別得到胎盤和子宮肌壁兩個(gè)感興趣區(qū)的時(shí)間一強(qiáng)度曲線和相關(guān)的參數(shù)值。造影結(jié)束取出所觀察的胎盤,做HE染色切片,應(yīng)用圖像分析軟件測(cè)量胎盤母體血管平均面積密度。
　　 2.60只健康SD孕鼠按實(shí)驗(yàn)要求分3組:孕15d、孕17d、孕20d,每組20只,各組胎盤分胎盤中央帶,胎盤邊緣帶。應(yīng)用超聲造影CPS技術(shù),機(jī)械指數(shù)(MI)0.2,經(jīng)鼠尾靜脈快速團(tuán)注SonoVue造影劑(1.0ml/kg),利用ACQ分析軟件分別得到胎盤中央帶、邊緣帶

7、兩個(gè)感興趣區(qū)的時(shí)間一強(qiáng)度曲線和相關(guān)參數(shù)值,同時(shí)應(yīng)用Sonoliver軟件得到胎盤中央帶、邊緣帶造影劑達(dá)峰時(shí)間曲線下面積。造影結(jié)束取出所觀察的胎盤,做HE染色切片,應(yīng)用圖像分析軟件測(cè)量胎盤中央帶、邊緣帶的母體血管平均面積密度。并采用免疫組化方法對(duì)胎盤中母體血管染色標(biāo)記。同時(shí),對(duì)胎盤造影前后進(jìn)行長(zhǎng)、厚徑及面積測(cè)量,解剖后應(yīng)用游標(biāo)卡尺測(cè)量造影中的胎盤長(zhǎng)、厚徑。
　　 3.60只健康SD孕鼠隨機(jī)分3組:對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組一(去甲腎上腺素)和

8、實(shí)驗(yàn)組二(山莨菪堿),每組20只。應(yīng)用CPS技術(shù),機(jī)械指數(shù)(MI)0.2,經(jīng)鼠尾靜脈快速團(tuán)注SonoVue造影劑(1.0ml/kg),利用ACQ分析軟件分別得到胎盤與子宮肌壁兩個(gè)感興趣區(qū)的時(shí)間一強(qiáng)度曲線和相關(guān)參數(shù)值。同時(shí),應(yīng)用Sonoliver軟件得到三組胎盤造影劑達(dá)峰時(shí)間曲線下的面積。比較實(shí)驗(yàn)組一、實(shí)驗(yàn)組二與對(duì)照組之間的差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.孕17d、20d兩組胎盤造影劑峰值強(qiáng)度(PI)高于孕15d胎盤(P＜

9、0.05),孕17d、20d兩組胎盤造影劑灌注峰值強(qiáng)度(PI)相近(P＞0.05)。孕15d、孕17d和孕20d胎盤造影劑到達(dá)時(shí)間(AT)、造影劑達(dá)峰值強(qiáng)度所用時(shí)間(TTP)相近(P＞0.05)。三組胎盤絨毛間隙母體血管床的面積密度之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。三組胎盤峰值強(qiáng)度(PI)與胎盤絨毛間隙母體血管面積密度呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　 2.孕15d、孕17d和孕20d三組胎盤HE染色結(jié)果:垂直斷面上呈“三明治

10、”樣三層組織結(jié)構(gòu),分別為絨毛膜板、絨毛和絨毛間隙、滋養(yǎng)層殼與蛻膜。絨毛內(nèi)可見胎兒毛細(xì)血管、成纖維細(xì)胞和膠原纖維。孕15d～孕20d胎盤絨毛數(shù)目增多并逐漸變得纖細(xì),間質(zhì)由疏松變得稍密,孕20d時(shí),間質(zhì)被壓縮成薄層。絨毛間隙中為母體外周血液,并隨著孕齡的增加而增加,紅細(xì)胞直接接觸絨毛表面。
　　 3.孕15d、孕17d和孕20d胎盤的中央帶造影劑到達(dá)時(shí)間(AT)與造影劑達(dá)峰時(shí)間(TTP)均早于邊緣帶(P＜0.05),中央帶峰值強(qiáng)度(

11、PI)均高于邊緣帶(P＜0.05)。各組胎盤的中央帶、邊緣帶母體血管床面積密度之間有明顯區(qū)別(P＜0.05)。胎盤中央帶、邊緣帶峰值強(qiáng)度(PI)與對(duì)應(yīng)的母體血管面積密度呈正相關(guān)(P＜0.05)。三組胎盤造影后測(cè)值小于造影前測(cè)值(P＜0.05),三組胎盤造影前長(zhǎng)、厚徑測(cè)值與游標(biāo)卡尺測(cè)值相近(P＞0.05)。
　　 4.孕15d、孕17d和孕20d三組胎盤免疫組化結(jié)果:Ⅷ因子在三組胎盤中均在胎盤胎兒毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中有表達(dá),陽性染色

12、表現(xiàn)為細(xì)胞膜呈棕黃色,包繞母體血液的滋養(yǎng)細(xì)胞未見陽性表達(dá),即在胎盤母體血管中無陽性表達(dá)。Laminin在孕15d、17d的胎盤絨毛上皮基膜、毛細(xì)血管內(nèi)皮基膜呈陽性表達(dá),基膜著色呈連續(xù)線狀,胎盤中流經(jīng)母體血液的區(qū)域被清晰地勾畫出來,而孕20d胎盤絨毛基底膜陽性表達(dá)呈不連續(xù)性或者缺失。
　　 5.對(duì)照組、去甲腎上腺素組與山莨菪堿組的造影劑到達(dá)時(shí)間、造影劑達(dá)峰時(shí)間相近(P＞0.05)。去甲腎上腺素組的峰值強(qiáng)度(PI)低于對(duì)照組(P＜0

13、.05),山莨菪堿組的峰值強(qiáng)度高于對(duì)照組(P＜0.05)。去甲腎上腺素組造影劑達(dá)峰時(shí)間曲線下面積值小于對(duì)照組(P＜0.05)。山莨菪堿組造影劑達(dá)峰時(shí)間曲線下面積值大于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.胎盤造影劑峰值強(qiáng)度(PI)與胎盤絨毛間隙母體血管面積密度有密切相關(guān)性。CPS技術(shù)可以敏感地反映胎盤發(fā)育過程中血管床面積的變化。
　　 2.胎盤中央帶與邊緣帶的血管床面積密度明顯不同。CPS技術(shù)可以敏感