β-淀粉樣多肽人源性單鏈抗體的制備與功能鑒定.pdf

1、阿爾茨海默病(AD)患者腦內β-淀粉樣多肽(Aβ)的形成和積聚，具有直接和間接的神經(jīng)毒性作用，在AD發(fā)病過程中起關鍵作用。阻止AD患者腦內Aβ積聚并予以清除已成為抗AD病因學療法的重要靶點。靶向Aβ的免疫治療，特異性高，副作用小?？笰β抗體通過多種機制介導腦內Aβ的清除，減輕轉基因AD模型小鼠腦內的Aβ負荷，緩解認知障礙。然而單克隆抗體的鼠源性特征限制其在臨床使用。本研究試圖從全人源性噬菌體抗體庫中篩選出抗Aβ特異性單鏈抗體，在充分鑒定

2、其生物學活性及其可能的抗Aβ藥理學作用后，建立新的AD免疫療法。 研究中，首先以Aβ1-40為靶標，應用噬菌體抗體庫技術，結果經(jīng)過五輪“吸附-洗脫-擴增”親和篩選，隨機挑取單克隆噬菌體抗體進行噬菌體ELISA檢測，結果發(fā)現(xiàn)一株高特異性抗Aβ噬菌體抗體——E3克隆。進一步提取E3克隆噬菌粒，轉化HB2151誘導表達，產(chǎn)生抗Aβ可溶性E3單鏈抗體，并進行His-trap親和層析純化。Westernblot證實E3單鏈抗體可與人工合成

3、的Aβ特異性結合，免疫組織化學結果顯示，E3單鏈抗體還可與大腦皮層神經(jīng)元天然分泌的Aβ特異性結合。將E3單鏈抗體與Aβ單體或Aβ纖維在體外共同孵育，透射電子顯微鏡和硫黃素T熒光分析顯示，E3單鏈抗體在體外不僅可阻止Aβ的聚集，更可逆轉Aβ的纖維聚集。在SK-N-SH細胞模型上的細胞毒性實驗中，20μMAβ聚集物處理組的細胞MTT值減少約60﹪；而用抗Aβ可溶性E3單鏈抗體處理后，細胞MTT值則增高，增高的程度與加入的E3抗體濃度呈正比，