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文檔簡介
1、近幾年來，有關(guān)單鏈抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展較快。由于單鏈抗體分子量小、免疫原性低、組織穿透力強(qiáng)、特異性好，與單克隆抗體相比，在腫瘤的診斷和治療方面展示了更好的應(yīng)用前景。已發(fā)現(xiàn)大約85％的人類惡性腫瘤具有端粒酶活性，所以抑制端粒酶為抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)提供了新的目標(biāo)。大量研究表明，端粒酶抑制劑將成為一種有效的新型抗腫瘤藥物?！ ”緦?shí)驗(yàn)通過抗端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)單克隆抗體制備hTERT的單鏈抗體，研究其在Lewis肺癌細(xì)胞中的抑
2、制腫瘤生長作用。采用RT-PCR技術(shù)從能持續(xù)分泌抗端粒酶hTERT單抗的雜交瘤細(xì)胞中克隆出抗體的輕鏈、重鏈可變區(qū)基因VL、VH。OverlapPCR將VL和VH用(Gly4Ser)4連接成hTERT的ScFv基因，連入原核表達(dá)載體pET19b，構(gòu)建成pET19b-ScFv，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)。通過SDS-PAGE和Western-blot分析，能夠很好地檢測(cè)到單鏈抗體的生物學(xué)活性。再將ScFv基因連入真核表達(dá)載體pEG
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