抗副溶血弧菌極鞭毛蛋白Fla B單鏈抗體的制備.pdf_第1頁(yè)
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1、副溶血弧菌是一種廣泛存在于水環(huán)境中的革蘭氏陰性嗜鹽菌,更是一種常見(jiàn)的食源性病原菌,可污染多種水產(chǎn)品,并引起人的食物中毒。其鞭毛基因系統(tǒng)復(fù)雜,參與粘附作用,包括周身鞭毛和極性鞭毛兩種形式。鞭毛基因系統(tǒng)包括約57個(gè)基因和3個(gè)開(kāi)放閱讀框,極性鞭毛系統(tǒng)與周身鞭毛系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與裝配成分并不分享。
　　 本實(shí)驗(yàn)試圖制備出一株抗其極鞭毛蛋白FIaB的高親和力的單鏈抗體,希望建立一種更快速檢測(cè)VP的檢測(cè)手段。本實(shí)驗(yàn)首先從VP基因組中PCR擴(kuò)增出f

2、laB基因,并構(gòu)建出重組質(zhì)粒pET32aq(+)-flaB。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌E.coliBL21(DE3),利用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白FlaB,經(jīng)Ni2+-NTA純化。
　　 以純化的目的蛋白作抗原免疫BalB/C小鼠,ELISA間接法檢測(cè)抗血清的效價(jià),效價(jià)達(dá)到后提取總RNA,通過(guò)RT-PCR反轉(zhuǎn)錄成cDNA、然后以cDNA模板PCR獲得抗體重鏈可變區(qū)基因VH和輕鏈可變區(qū)基因VL,再用15氨基

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