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文檔簡介
1、本研究在人絨毛膜促性腺激素(hCG)的結(jié)合多肽的基礎上應用嫁接抗體技術(shù)制備抗hCG單域抗體,簡化單域抗體制備過程,提高多肽生化穩(wěn)定性。利用單域抗體通用骨架(cAbBCII10),以hCG結(jié)合多肽取代互補決定區(qū)CDR1或CDR3,合成cAbBCII10嫁接抗體全基因序列并與sfGFP基因序列融合后,插入到帶有His標簽的原核表達載體pET30a(+)中,成功構(gòu)建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sf
2、GFP與pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP融合蛋白表達質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),用IPTG誘導表達融合蛋白,得到高表達量的可溶性融合蛋白。利用Ni-NTA親和柱純化得到純蛋白,應用SDS-PAGE鑒定純化的蛋白為正確表達的目標蛋白。通過抗原抗體結(jié)合實驗,發(fā)現(xiàn)hCG結(jié)合多肽嫁接到單域抗體通用骨架的互補決定區(qū)CDR1或CDR3后都有抗原結(jié)合活性,具有相似的抗體滴度,且嫁接
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